การปรับระบบเส้นทางแสงของภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและโครงร่างการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์
การปรับระบบเส้นทางการมองเห็นด้วยแสงและโครงร่างการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์
การปรับระบบการมองเห็นของกล้องจุลทรรศน์จะดำเนินการตามความต้องการของเทคนิคกล้องจุลทรรศน์ต่างๆ โดยสรุปสิ่งที่เรียกว่ากล้องจุลทรรศน์คือวิธีการให้แสงสว่างที่ใช้ในการสังเกตตัวอย่างผ่านกล้องจุลทรรศน์ ตลอดจนเทคนิคและวิธีการเพื่อให้ได้คอนทราสต์ที่ดีขึ้นในภาพที่เกิดจากตัวอย่าง ต่อไปนี้จะอธิบายโดยย่อว่ากล้องจุลทรรศน์เจริญเต็มที่ในหลายวิธี และวิธีการปรับระบบออปติคอลการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่สอดคล้องกัน
1. สนามส่งแสงสว่าง:
นี่เป็นวิธีการประยุกต์แบบดั้งเดิมที่ใช้กันทั่วไปมากที่สุดนับตั้งแต่มีการประดิษฐ์กล้องจุลทรรศน์ ส่วนประกอบพื้นฐาน: เลนส์ใกล้วัตถุ: เลนส์ใกล้วัตถุใดๆ สามารถใช้สำหรับการสังเกตสนามที่สว่าง ข. ขอบเขตการจำ: สามารถใช้ขอบเขตการจำทุกชนิดได้ โดยควรติดตั้งไดอะแฟรมรูรับแสงไว้ด้วย วิธีการปรับ: หลังจากปรับระบบการส่องสว่าง Kuhler ของกล้องจุลทรรศน์ข้างต้นแล้ว คุณจะสามารถนำวิธีสนามสว่างมาใช้ได้ ขอบเขตการใช้งาน: ทุกส่วนของเนื้อเยื่อเปื้อน, รอยเปื้อนเลือด ฯลฯ เมื่อใช้วิธีการสังเกตด้วยสนามสว่าง จะต้องปรับระบบการส่องสว่างของ Kuhler ข. ไม่ควรเปิดไดอะแฟรมของมุมมองโดยพลการ และควรวางเลนส์ด้านหน้าของกระจกคอนเดนเซอร์ออกและเข้าสู่เส้นทางแสงตามลำดับเมื่อใช้เลนส์ใกล้วัตถุ 10 × น้อยกว่า 10 × และมากกว่า 10 ×; ค. ไม่ควรใช้ไดอะแฟรมรูรับแสงของกระจกคอนเดนเซอร์เพื่อปรับความสว่างของมุมมอง และไม่ควรปรับความสูงของกระจกคอนเดนเซอร์โดยไม่เลือกปฏิบัติ มิฉะนั้นความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์จะลดลงและความละเอียดของเนื้อเยื่อที่เปื้อน จะได้รับความเสียหาย ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์และความเสียหายได้รับการปรับให้เข้ากับระบบส่องสว่างของ Kuhler แล้ว ง. สำหรับไมโครกราฟ การเปลี่ยนแปลงในการใช้กำลังขยายของเลนส์ใกล้วัตถุทุกครั้ง คุณต้องปรับไดอะแฟรมรูรับแสงของเลนส์คอนเดนเซอร์ เพื่อให้ขนาดของมันเท่ากับค่ารูรับแสงตัวเลขที่ใช้ในเลนส์ใกล้วัตถุ 2/3 ทุกประการ
2. วิธีคอนทราสต์เฟสแสงที่ส่ง:
นี่คือการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์สมัยใหม่สำหรับวิธีการเพิ่มคอนทราสต์ ส่วนประกอบพื้นฐาน: เลนส์ใกล้วัตถุคอนทราสต์เฟส, มุมมองที่สว่างและขอบเขตการมองเห็นอเนกประสงค์คอนทราสต์เฟส, กล้องโทรทรรศน์โฟกัส, ฟิลเตอร์สีเขียว
วิธีการปรับ:
ก. ตามการปรับระบบส่องสว่างของ Kuhler ให้โฟกัสตัวอย่างให้ชัดเจนโดยใช้วิธีสนามสว่าง
ข. หมุนขอบเขตการจำไปที่ Ph1 เพื่อจัดตำแหน่งสเกลของวงแหวน เลือกเลนส์ใกล้วัตถุคอนทราสต์เฟส 10 × และแทนที่ตัวอย่างโปร่งใสที่จะสังเกต
ค. ถอดปลั๊กช่องมองภาพข้างหนึ่งออก แทนที่ด้วยกล้องโทรทรรศน์ที่อยู่ตรงกลาง และโฟกัสไปที่วงแหวนคอนทราสต์สองเฟสในขอบเขตการมองเห็น (วงแหวนคอนทราสต์เฟสสีดำของเลนส์ใกล้วัตถุและวงแหวนคอนทราสต์เฟสการส่งผ่านแสงของเลนส์คอนเดนเซอร์)
ง. วงแหวนคอนทราสต์สองเฟสในขอบเขตการมองเห็นอาจไม่ตรงกัน ให้ปรับอุปกรณ์ปรับสองตัวบนขอบเขตการจำ (การปรับตำแหน่งซ้ายและขวาของก้านปรับวงแหวนคอนทราสต์เฟส และปรับตำแหน่งด้านหน้าและด้านหลังของปุ่มเสียดทาน) เพื่อให้วงแหวนส่งแสงด้านหน้าและด้านหลังไปทางขวาและซ้ายให้ตรงกับวงแหวนสีดำ
จ. หลังจากปรับแล้ว ให้เปลี่ยนกลับไปที่ช่องมองภาพเพื่อการสังเกต และกดฟิลเตอร์สีเขียวเข้าไปในเส้นทางแสงเพื่อสังเกตภาพคอนทราสต์เฟสของตัวอย่าง
ฉ. เมื่อมีเลนส์ใกล้วัตถุ 20× และ 40× สำหรับการสังเกต ควรตั้งค่าเลนส์เล็งไว้ที่ตำแหน่ง Ph2 และเมื่อใช้เลนส์ใกล้วัตถุ 100 ตัว เลนส์เล็งควรตั้งค่าไว้ที่ตำแหน่ง Ph3
ขอบเขตการใช้งาน: เหมาะสำหรับการสังเกตตัวอย่างที่โปร่งใส ไม่มีรอยเปื้อน หรือไม่เปื้อน เช่น เซลล์ทุกชนิด เนื้อเยื่อที่มีชีวิต ส่วนเนื้อเยื่อที่ไม่มีรอยเปื้อนหรือไม่เปื้อน สิ่งมีชีวิตในน้ำ และอื่นๆ
3. วิธีคอนทราสต์เฟสการรบกวนแบบดิฟเฟอเรนเชียล:
เพื่อเอาชนะวิธี Phase Contrast ในการสังเกตรายละเอียดตัวอย่างรอบๆ ภาพที่มีรัศมี จะปกปิดรายละเอียดที่ควรเห็นออกไป เช่นเดียวกับตัวอย่างหรือส่วนของเนื้อเยื่อที่ต้องการความหนาค่อนข้างบาง โดยหลักการแล้วสามารถ มีความหนามากกว่า 10?m และข้อจำกัดอื่นๆ การใช้หลักการของการรบกวนแบบคานคู่เพื่อออกแบบวิธีคอนทราสต์เฟสการรบกวนแบบอนุพันธ์ย่อย
วิธีการปรับ:
ก. ต้องปรับวิธี DIC บนพื้นฐานที่มีการปรับระบบ Kulemin แล้ว
ข. ใช้เลนส์ใกล้วัตถุ 10 เท่า กำหนดตำแหน่งโฟกัสของเลนส์ใกล้วัตถุที่สามารถมองเห็นตัวอย่างได้ชัดเจนด้วยขอบเขตการมองเห็นที่สว่าง
ค. วางโพลาไรเซอร์ไว้ในเส้นทางการส่องสว่าง โดยสังเกตว่าควรวางในทิศทางตะวันออก-ตะวันตก
ง. หมุนแป้นหมุนคอนเดนเซอร์ไปยังตำแหน่งที่สอดคล้องกับการใช้เลนส์ใกล้วัตถุ 10 × เช่น DIC 0.3-0.4.
จ. ใส่แถบเลื่อน DIC สำหรับเลนส์ใกล้วัตถุ 10× ที่ด้านหลังของเลนส์ใกล้วัตถุหรือบนคอนเวอร์เตอร์
ฉ. ใส่เครื่องวิเคราะห์เข้าไปในเส้นทางแสงของภาพ และโปรดทราบว่าการวางแนวของเครื่องควรอยู่ทางทิศใต้-ทิศเหนือ
ก. เปลี่ยนตัวอย่างโปร่งใสที่จะสังเกต เปิดแหล่งกำเนิดแสงเพื่อโฟกัสตัวอย่างให้ชัดเจน
ชม. ปรับการแทรก DIC เพื่อให้ภาพคอนทราสต์การรบกวนที่แตกต่างกันเพื่อให้ได้เอฟเฟกต์ที่ดีที่สุด นั่นคือเอฟเฟกต์การบรรเทาที่ชัดเจนที่สุด
ฉัน. ในเวลาเดียวกัน ให้ปรับไดอะแฟรมรูรับแสงของกระจกคอนเดนเซอร์ เพื่อให้เอฟเฟ็กต์ของคอนทราสต์มีความเหมาะสมที่สุด
เจ จากนั้นปรับแต่งรายละเอียดของตัวอย่างเพื่อดูโครงสร้างของตัวอย่างในระดับต่างๆ
เค หากใส่สีเสริม (แผ่นหน่วงสีแดงลำดับแรก) และเม็ดมีด DIC ถูกปรับพร้อมกัน จะมองเห็นสีสดใสที่เปลี่ยนแปลงตลอดเวลาในขอบเขตการมองเห็น โดยมีสีแดง สีส้ม เหลือง เขียว น้ำเงิน ม่วง ชมพู ชมพูม่วง และเหลืองทอง ขอบเขตการใช้งาน: ส่วนเนื้อเยื่อโปร่งใสหรือไม่เสถียร ความหนาสูงสุดประมาณ 100µm เนื้อเยื่อที่มีชีวิตและเซลล์ที่มีชีวิตในการเพาะเลี้ยง สิ่งมีชีวิตขนาดเล็ก และอื่นๆ
