กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพเกี่ยวกับปริมาตรของบล็อกเนื้อเยื่อ
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ จนถึงขณะนี้ การตรึงด้วยความเย็น การแบ่งส่วนบางเฉียบแบบแช่แข็ง และการทำแห้งแบบแช่แข็งเป็นวิธีการประจำสำหรับการเอ็กซเรย์ส่วนไมโครของเนื้อเยื่อและเซลล์ ต่อไปนี้เป็นรายละเอียดของวิธีนี้:
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่มีคอนเดนเซอร์ สามารถเลื่อนคอนเดนเซอร์ขึ้นและลงเพื่อให้ได้ความสว่างปานกลาง นอกจากนี้ รูรับแสงของไดโอดเปล่งแสงแบบแปรผันสามารถเปลี่ยนแปลงได้เพื่อให้ได้ความสว่างปานกลาง 9b หากแสงสว่างสามารถยกคอนเดนเซอร์ได้อย่างเหมาะสมและสามารถขยายรูรับแสงของแสงที่แปรผันได้อย่างเหมาะสม หากแสงจ้าเกินไป คอนเดนเซอร์สามารถลดระดับลงได้อย่างเหมาะสม และลดรูรับแสงของลำแสงขวางได้อย่างเหมาะสม หากคุณยังคงรู้สึกตื่นตาในสถานการณ์เช่นนี้ คุณสามารถเลือกตัวกรองที่เหมาะสมและวางไว้บนโครงยึดใต้คอนเดนเซอร์ได้ ด้วยวิธีนี้คุณจะได้รับความสว่างที่ตรงใจคุณ แน่นอนว่าต้องใช้เวลาฝึกฝนสักระยะหนึ่งจึงจะมีประสบการณ์ในการปรับตำแหน่งขึ้นและลงของคอนเดนเซอร์เพื่อให้ได้ขนาดรูรับแสงที่ปรับเปลี่ยนได้และเลือกฟิลเตอร์ที่เหมาะสม
ปัญหาที่สำคัญมากในกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพคือในระหว่างกระบวนการรวบรวมและแยกเซลล์ หลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็งและการฝังเรซิน (FD) หลังจากการแช่แข็งเม็ดเล็กพิเศษ และหลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็ง ปริมาณธาตุ 65 ของแต่ละส่วนจะต้อง ต้องวิเคราะห์อย่างรอบคอบและไม่ทำลายเซลล์ที่จะวิเคราะห์อย่างแน่นอน เนื่องจากการวิเคราะห์พื้นที่ไมโครรังสีเอกซ์ไม่เพียงเกี่ยวข้องกับหลายขั้นตอน แต่ยังมีค่าใช้จ่ายสูงอีกด้วย หากหลังจากใช้เวลานานและหลายขั้นตอน เซลล์ที่วิเคราะห์เป็นเซลล์ที่เสียหายหรือเซลล์ที่ตายแล้ว ก็น่าเสียดายที่จะสรุปผลผิด ตัวอย่างเช่น คาร์ดิโอไมโอไซต์ที่แยกได้หลังการรักษาด้วยคอลลาเจนเนสจะมีรูปร่างสองแบบ รูปทรงหนึ่งเป็นรูปแท่งยาว และอีกรูปทรงทรงกลม ส่วนหลังคือเซลล์ที่กำลังจะตายซึ่งได้รับความเสียหายระหว่างการแยกเซลล์
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ ปริมาณและการกระจายตัวของอิเล็กโทรไลต์ในเซลล์ทั้งสองชนิดนี้มีความแตกต่างกันมาก Na สูงมาก และ K ต่ำมากในคาร์ดิโอไมโอไซต์ทรงกลม และความเข้มข้นของ Ca ในกิ่งก้านเชิงเส้นนั้นสูงมาก หลังจากตรวจสอบด้วยวิธีการวิเคราะห์อื่นๆ แล้ว พบว่าค่า Na สูงและค่า K ต่ำในเซลล์ทรงกลม และค่า Ca ที่สูงในไมโตคอนเดรีย เกิดจากความเสียหายต่อเยื่อหุ้มเซลล์ในระหว่างกระบวนการแยกเซลล์ วิธีการตรึงเซลล์และเนื้อเยื่อด้วยความเย็นมักจะทำให้เซลล์และเนื้อเยื่อเย็นลงและแก้ไขก่อน แล้วจึงเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว การชุบแข็งและการตรึงมีความสำคัญมากต่อผลการเก็บรักษา เซลล์ที่มีชีวิตหรือเนื้อเยื่อสดอุดมไปด้วยน้ำ เมื่อดับชิ้นส่วนของเซลล์หรือเนื้อเยื่อที่สัมผัสโดยตรงกับไครโอเจน (โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อดับด้วยไนโตรเจนเหลว) จะถูกแช่แข็งและตรึงไว้ก่อน จึงเกิดเป็น "เปลือก" ซึ่งเป็นอุปสรรคต่อส่วนที่ส่วนกลางของเซลล์ถูกบดอัด และแบบแช่เย็น ดังนั้นเมื่อทำการวิเคราะห์พื้นที่จุลภาคด้วย X-line จึงมักพบว่ามีผลึกน้ำแข็งอยู่ตรงกลางของเซลล์ขนาดใหญ่ เพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งนี้เกิดขึ้น สารที่มีจุดหลอมเหลวสูงกว่าไนโตรเจนเหลวแต่มีความแห้งน้อยกว่า -806c จะถูกนำมาใช้เป็นสารทำความเย็นแบบบด มีสารประเภทนี้อยู่มากมาย แต่สารที่ง่ายและถูกที่สุดคือโพรเพนเข้มข้น (จุดเดือด - 42.120c, จุดหลอมเหลว - 187.10c, น้ำหนักโมเลกุล 44.1) และอัตราการเย็นตัวก็เร็วที่สุดเช่นกัน แต่ข้อเสียคือมันติดไฟได้
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพสามารถนำเส้นใยกล้ามเนื้อไปวางบนเฟรมพิเศษได้ เมื่อการหดตัวของเส้นใยกล้ามเนื้อถึงระยะหนึ่งและจำเป็นต้องได้รับการแก้ไข หัวฉีดจะเริ่มทำงานทันทีเพื่อพ่นโพรเพนเหลวไปยังเส้นใยกล้ามเนื้อเพื่อดับและแก้ไข จากนั้นนำเส้นใยกล้ามเนื้อและโครงออกแล้วใส่ลงในไนโตรเจนเหลว หากเซลล์เม็ดเลือดหรือเซลล์ที่แยกออกจากกันได้รับการแก้ไขแล้ว ให้ปั่นแยกด้วยความเร็วต่ำเพื่อให้เซลล์รวมตัว ย้ายเซลล์ไปยังหลอดเงินขนาดเล็กที่มีการนำความร้อนได้ดี วางหลอดในโพรเพนเหลวแล้วแช่แข็งเพื่อแก้ไข เมื่อซ่อมตับอ่อนหนูในห้องปฏิบัติการ Hall ขั้นแรกให้ระบายความร้อนบล็อกเหล็กทั้งสองด้วยฮีเลียมเหลว (หรือไนโตรเจนเหลว) ก่อน จากนั้นใช้คีมจับบล็อกทองแดงทั้งสองบล็อก แล้ววางไว้ก่อนและหลังตับอ่อนเพื่อดับและแก้ไขต่อมมดลูก . เนื้อเยื่อหรือเซลล์สามารถดับและแก้ไขได้ จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาในระยะยาว
