กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพกับปริมาตรของบล็อกเนื้อเยื่อ
การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ ในปัจจุบัน การตรึงด้วยความเย็นด้วยน้ำแข็ง ส่วนที่บางเฉียบแบบแช่แข็ง และการจัดการแบบแห้งแบบแช่แข็ง เป็นวิธีการประจำสำหรับเอ็กซเรย์ไมโครฟิลด์ของเนื้อเยื่อและเซลล์ รายละเอียดของวิธีการอธิบายไว้ในประเด็นต่อไปนี้:
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ กล้องจุลทรรศน์ที่มีเลนส์คอนเดนเซอร์สามารถเลื่อนขึ้นและลงเพื่อให้ได้ความสว่างปานกลาง หรือสามารถเปลี่ยนรูรับแสงของตัวขยายแสงแบบแปรผันเพื่อให้ได้ความสว่างปานกลาง 9b ถ้าแสงมีแดด ขอบเขตการจำสามารถเพิ่มขึ้นได้อย่างเหมาะสม และสามารถขยายรูรับแสงของแสงที่แปรผันได้อย่างเหมาะสม หากแสงจ้าเกินไป กระจกสปอตไลท์ก็สามารถลดระดับลงได้อย่างเหมาะสม โดยรูรับแสงของแสงที่แปรผันจะกระโดดเพื่อลดขนาดที่เหมาะสมได้ หากในกรณีนี้ยังรู้สึกไม่ชัดเจน คุณสามารถเลือกฟิลเตอร์ที่เหมาะสมซึ่งวางไว้ในฉากยึดใต้สปอตไลท์ได้ เท่านี้ก็สามารถทำให้คุณพึงพอใจกับความสดใสได้ แน่นอนว่าในการปรับตำแหน่งบนและล่างของเลนส์คอนเดนเซอร์ขนาดรูรับแสงที่อ่านได้และการเลือกฟิลเตอร์ที่เหมาะสมอาจแตกต่างกันไป ซึ่งก็คือหลังจากฝึกฝนและประสบการณ์มาระยะหนึ่งแล้ว
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ ปัญหาที่สำคัญมากอยู่ในกระบวนการสุ่มตัวอย่างและแยกเซลล์ การทำแห้งแบบเยือกแข็งและการฝังเรซิน (FD) หลังจากการแช่แข็งอัลตราบุ๊คเล็ต การทำแห้งแบบเยือกแข็งหลังจากการทำงานอย่างละเอียดของส่วนประกอบแต่ละส่วนของเนื้อหาองค์ประกอบ 65 ชนิด ได้รับการดูแลอย่างระมัดระวัง และต้องไม่ทำลายเซลล์ที่ต้องสังเกตและวิเคราะห์ เนื่องจากการวิเคราะห์พื้นที่ไมโครเอ็กซ์เรย์ด้วยรังสีเอกซ์ไม่เพียงแต่ใช้ขั้นตอนจำนวนมากและมีค่าใช้จ่ายสูงมาก หากหลังจากใช้เวลานานและหลายขั้นตอนในการประมวลผล เซลล์ที่วิเคราะห์เป็นเซลล์ที่เสียหายหรือเซลล์ที่ตายแล้ว เพื่อให้ได้ข้อสรุปที่ผิด เป็นเรื่องน่าเสียใจมาก ตัวอย่างเช่น คาร์ดิโอไมโอไซต์ที่แยกได้โดยการรักษาด้วยคอลลาจีเนสจะมีสัณฐานวิทยาสองแบบ อย่างหนึ่งเป็นรูปแท่งยาวและอีกอันเป็นรูปทรงกลม ส่วนหลังคือเซลล์ที่กำลังจะตายซึ่งได้รับความเสียหายระหว่างการแยกเซลล์
การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ ปริมาณและการกระจายตัวของอิเล็กโทรไลต์ในเซลล์ทั้งสองชนิดนี้มีความแตกต่างกันมาก คาร์ดิโอไมโอไซต์ทรงกลมมีค่า Na สูงมาก และ K ต่ำมาก และความเข้มข้นของ Ca นั้นสูงมากในไมโตคอนเดรีย หลังจากตรวจสอบด้วยวิธีการวิเคราะห์อื่นๆ พบว่า Na สูงและ K ต่ำในเซลล์ทรงกลม และ Ca สูงในไมโตคอนเดรียเป็นผลมาจากความเสียหายต่อเยื่อหุ้มเซลล์ในระหว่างการแยกเซลล์ การตรึงเซลล์และเนื้อเยื่อด้วยความเย็นมักกระทำโดยการตรึงแบบดับแล้วตามด้วยการเก็บรักษาในไนโตรเจนเหลว การตรึงดับเป็นสิ่งสำคัญต่อประสิทธิผลของการเก็บรักษา เซลล์ที่มีชีวิตหรือเนื้อเยื่อสดอุดมไปด้วยน้ำ เมื่อการดับมักจะเป็นเซลล์หรือเนื้อเยื่อและสารทำความเย็น (โดยเฉพาะไนโตรเจนเหลว ความเย็นบริสุทธิ์) สัมผัสโดยตรงกับชิ้นส่วนของการแช่แข็งครั้งแรก จึงเกิดเป็น "เปลือก" ซึ่ง ป้องกันการตรึงความเย็นตรงกลางเซลล์ ผลก็คือ ผลึกน้ำแข็งมักพบในใจกลางของเซลล์ขนาดใหญ่ในระหว่างการวิเคราะห์ไมโครเซลล์ด้วยรังสีเอกซ์ เพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งนี้เกิดขึ้น สารที่มีจุดหลอมเหลวสูงกว่าไนโตรเจนเหลวแต่ต่ำกว่า 806c แบบแห้งจะถูกใช้เป็นสารทำความเย็น มีสารดังกล่าวอยู่มากมาย แต่ *ได้มาง่าย ราคาไม่แพง คือ โพรเพนเข้มข้น (จุดเดือด 42.120c จุดหลอมเหลว 187.10c น้ำหนักโมเลกุล 44.1) อัตราการเย็นตัว* เร็ว แต่ก็มีข้อเสียของการติดไฟได้
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพสามารถวางบนเส้นใยกล้ามเนื้อชั้นพิเศษ เพื่อให้การหดตัวของเส้นใยกล้ามเนื้อถึงช่วงระยะเวลาหนึ่งต้องได้รับการแก้ไข เริ่มต้นหัวฉีดทันที เพื่อให้โพรเพนเหลวไปยังเจ็ทเส้นใยกล้ามเนื้อ เพื่อให้การดับของ ความเย็นคงที่ จากนั้นนำเส้นใยกล้ามเนื้อออกมาพร้อมแร็คแล้วใส่ลงในไนโตรเจนเหลว หากติดตั้งเซลล์เม็ดเลือดหรือเซลล์ที่แยกได้ ให้หมุนเหวี่ยงด้วยความเร็วต่ำครั้งแรกเพื่อให้เซลล์มีความเข้มข้น เซลล์จะถูกถ่ายโอนไปยังท่อเงินที่มีการนำความร้อนที่ดี ท่อเข้าไปในซากโพรเพนเหลวที่เย็นคงที่ ห้องปฏิบัติการฮอลล์คงตับอ่อนหนู เหล็กสองชิ้นแรกที่มีฮีเลียมเหลว (หรือไนโตรเจนเหลว) ระบายความร้อนล่วงหน้า โดยมีแคลมป์จับไว้ ทองแดงทั้งสองชิ้นจะถูกวางไว้ด้านหน้าและด้านหลังตับอ่อน เพื่อให้ป้าของ ต่อมดับการตรึงความเย็น เนื้อเยื่อหรือเซลล์สามารถเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวได้เป็นเวลานานหลังจากการดับและตรึง
