เปรียบเทียบกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลกับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดา
กล้องจุลทรรศน์เป็นเครื่องมือหลักในการสังเกตเซลล์ ขึ้นอยู่กับแหล่งกำเนิดแสงสามารถแบ่งออกเป็นสองประเภท: กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน แบบแรกใช้แสงที่มองเห็นได้ (กล้องจุลทรรศน์อัลตราไวโอเลตไปจนถึงแสงอัลตราไวโอเลต) เป็นแหล่งกำเนิดแสง ในขณะที่แบบหลังใช้ลำอิเล็กตรอนเป็นแหล่งกำเนิดแสง กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไปและกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลแบบเลเซอร์อยู่ในกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเดียวกัน
I. กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไป
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพทั่วไปประกอบด้วยสามส่วน ได้แก่ 1 ระบบส่องสว่าง รวมถึงแหล่งกำเนิดแสงและคอนเดนเซอร์ 2 ระบบการขยายด้วยแสง ซึ่งประกอบด้วยวัตถุประสงค์และช่องมองภาพ เป็นส่วนหลักของกล้องจุลทรรศน์ เพื่อขจัดความคลาดเคลื่อนทรงกลมและความคลาดเคลื่อนของสี ช่องมองภาพและวัตถุประสงค์จะประกอบด้วยกลุ่มเลนส์ที่ซับซ้อน 3 อุปกรณ์ทางกล ใช้ในการยึดวัสดุและการสังเกตความสะดวก
วัตถุกล้องจุลทรรศน์มีความชัดเจนไม่เพียงแต่ถูกกำหนดโดยการขยายเท่านั้น แต่ยังด้วยกำลังการแก้ไขของกล้องจุลทรรศน์ (ความละเอียด) กำลังการแก้ไขหมายถึงกล้องจุลทรรศน์ (หรือสายตามนุษย์จากเป้าหมาย 25 ซม.) สามารถแยกแยะความแตกต่างของวัตถุ zui ช่วงเวลาเล็ก ๆ ของความสามารถในการ แยกแยะขนาดของกำลังการแยกส่วนได้ถูกกำหนดโดยความยาวคลื่นของแสงและอัตราปากของกระจกและดัชนีการหักเหของตัวกลางที่แสดงในสูตร:
R=0.61แล /NANA=nsin /2 โดยที่: n=ดัชนีการหักเหของตัวกลาง;=มุมปากกระจก (ตัวอย่างบนปากเลนส์ใกล้วัตถุของมุมตึง), NA=อัตราปากกระจก (รูรับแสงตัวเลข) มุมปากกระจกจะต้องน้อยกว่า 180? ดังนั้นค่าซุยของไซนา/2 จึงจำเป็นต้องน้อยกว่า 1 เสมอ
ดัชนีการหักเหของแก้วที่ใช้ในการผลิตเลนส์สายตาคือ 1.65 ~ 1.78 ดัชนีการหักเหของตัวกลางที่ใช้ยิ่งใกล้กับกระจกยิ่งดี สำหรับเลนส์ใกล้วัตถุแห้ง สื่อสำหรับอากาศ อัตราปากกระจกโดยทั่วไปคือ 0.05 ~ 0.95; เลนส์น้ำมันที่มีน้ำมันซีดาร์เป็นสื่อ อัตราปากกระจกสามารถอยู่ใกล้ 1.5
ความยาวคลื่นแสงธรรมดา 400~700nm ดังนั้นค่ากำลังในการแก้ไขกล้องจุลทรรศน์จะต้องไม่น้อยกว่า 0.2μm พลังในการแก้ปัญหาของสายตามนุษย์คือ 0.2 มม. ดังนั้นการออกแบบทั่วไปของกำลังขยายของกล้องจุลทรรศน์ zui โดยปกติจะเป็น 1,000X
ประการที่สอง กล้องจุลทรรศน์สแกนคอนโฟคอลแบบเลเซอร์
กล้องจุลทรรศน์สแกนคอนโฟคอลเลเซอร์ (Laser Confocal Scanning Microscope) โดยมีเลเซอร์เป็นแหล่งกำเนิดแสงในการสแกน ทีละจุด ทีละบรรทัด พื้นผิวโดยพื้นผิว การถ่ายภาพด้วยการสแกนอย่างรวดเร็ว เลเซอร์สแกนและคอลเลกชันเรืองแสงของวัตถุประสงค์ทั่วไป จุดโฟกัสด้วยเลเซอร์สแกนวัตถุ แต่ยังรวมถึงการถ่ายภาพจุดวัตถุในทันที เนื่องจากความยาวคลื่นที่สั้นกว่าของลำแสงเลเซอร์ ลำแสงจึงละเอียดมาก ดังนั้นกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลเลเซอร์สแกนจึงมีความละเอียดสูงประมาณ 3 เท่าของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไป ระบบจะถูกโฟกัสเพียงครั้งเดียว และการสแกนจะถูกจำกัดไว้ที่ระนาบเดียวของกลุ่มตัวอย่าง เมื่อความลึกในการโฟกัสไม่เท่ากัน สามารถรับภาพที่มีระดับความลึกต่างกันของตัวอย่างได้ และข้อมูลภาพเหล่านี้จะถูกจัดเก็บไว้ในคอมพิวเตอร์ โดยผ่านการวิเคราะห์และจำลองด้วยคอมพิวเตอร์ ก็สามารถแสดงโครงสร้างสามมิติของตัวอย่างเซลล์ได้ .
