การกำหนดจำนวนจุลินทรีย์ - วิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์!
พื้นฐาน
วิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์เป็นวิธีการที่ง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่ายในการวางสารแขวนลอยของตัวอย่างจำนวนเล็กน้อยเพื่อทดสอบบนสไลด์แก้วพิเศษ (หรือที่เรียกว่าเครื่องนับแบคทีเรีย) โดยมีพื้นที่และปริมาตรที่แน่นอน และนับโดยตรงภายใต้ กล้องจุลทรรศน์ ปัจจุบันเครื่องนับแบคทีเรียที่ใช้กันทั่วไปทั้งในและต่างประเทศ ได้แก่ บอร์ดนับเม็ดเลือด เครื่องนับแบคทีเรีย Peteroff-Hauser และเครื่องนับแบคทีเรีย Hawksley เป็นต้น โดยทั้งหมดนี้สามารถใช้เพื่อนับสารแขวนลอย เช่น ยีสต์ แบคทีเรีย และสปอร์ของเชื้อรา และ หลักการพื้นฐานจะเหมือนกัน เครื่องนับแบคทีเรียสองตัวหลังมีปริมาตรรวม 0.02 มม.3 หลังจากถูกคลุมด้วยกระจกครอบ และระยะห่างระหว่างกระจกครอบและสไลด์มีเพียง 0.02 มม. ดังนั้นเซลล์ขนาดเล็กเช่น สามารถสังเกตและนับจำนวนแบคทีเรียได้ด้วยเลนส์ใกล้วัตถุแบบแช่น้ำมัน นอกจากการใช้เครื่องนับแบคทีเรียเหล่านี้แล้ว ยังมีวิธีการประมาณค่าโดยสังเกตอัตราส่วนของพื้นที่สเมียร์โดยตรงต่อพื้นที่ลานสายตาภายใต้กล้องจุลทรรศน์อีกด้วย โดยทั่วไปวิธีนี้ใช้สำหรับการตรวจทางแบคทีเรียในนม ข้อดีของวิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์คือ ใช้งานง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่าย แต่ข้อเสียของวิธีนี้คือผลที่วัดได้มักจะเป็นผลรวมของแบคทีเรียที่ตายแล้วและมีชีวิต ในปัจจุบัน มีวิธีการบางอย่างที่จะเอาชนะข้อบกพร่องนี้ เช่น การรวมแบคทีเรียที่มีชีวิตซึ่งย้อมสีจุลินทรีย์ในห้องเพาะเลี้ยง (ระยะเวลาอันสั้น) และการเพิ่มสารยับยั้งการแบ่งเซลล์เพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ในการนับเฉพาะแบคทีเรียที่มีชีวิต
ในการทดลองนี้ มีการใช้ฮีโมไซโตมิเตอร์เป็นตัวอย่างในการนับโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ สำหรับวิธีการใช้งานเครื่องนับแบคทีเรียอีก 2 เครื่อง โปรดดูคำแนะนำของผู้ผลิตแต่ละราย การนับโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ด้วยเครื่องวัดเม็ดเลือดเป็นวิธีการนับจำนวนจุลินทรีย์ที่ใช้กันทั่วไป บอร์ดนับเป็นสไลด์แก้วที่ทำขึ้นเป็นพิเศษซึ่งมีสี่ช่องประกอบเป็นสามแพลตฟอร์ม แท่นที่กว้างขึ้นตรงกลางแบ่งออกเป็นสองซีกโดยมีช่องแนวนอนสั้น ๆ และแต่ละด้านของแท่นก็เรียงรายไปด้วยตาราง แต่ละตารางจะแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่เก้าช่อง และสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ตรงกลางคือห้องนับ โดยทั่วไปขนาดของห้องนับจะมีข้อกำหนดสองประการ ประการแรกคือสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมตรงกลาง 25 อัน และสี่เหลี่ยมตรงกลางแต่ละอันแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ 16 อัน อีกประการหนึ่งคือสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แบ่งเป็นช่องกลาง 16 ช่อง และแต่ละช่องกลางแบ่งออกเป็นช่องเล็ก 25 ช่อง แต่ไม่ว่ากระดานนับประเภทใดก็จะมีช่องเล็ก ๆ 400 ช่องในนั้น แต่ละสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ ความยาวด้านข้างของสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แต่ละอันคือ 1 มม. และพื้นที่ของสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แต่ละอันคือ 1 มม. 2 หลังจากปิดกระจกครอบแล้ว ความสูงระหว่างกระจกครอบกับกระจกสไลด์คือ 0.1 มม. ดังนั้นปริมาตรของ ห้องนับคือ 0.1 มม. (หนึ่งในหมื่นมิลลิลิตร)
