การหาจำนวนจุลินทรีย์-วิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์!
การเติบโตของจำนวนแบคทีเรียนั้นเกิดจากการเพิ่มจำนวนเซลล์หรือการเพิ่มขึ้นของวัสดุเซลล์ วิธีการระบุจำนวนเซลล์ประกอบด้วยการนับด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรง การนับจำนวนเพลต การประมาณค่าความขุ่นด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ MPN จำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด และการกรองเมมเบรน (การกรองเมมเบรน) ฯลฯ วิธีการตรวจวัดสารในเซลล์ ได้แก่ การกำหนดน้ำหนักแห้งของเซลล์ การกำหนดส่วนประกอบของเซลล์บางอย่าง เช่น ปริมาณไนโตรเจน ปริมาณ RNA และ DNA และการกำหนดผลิตภัณฑ์เมตาบอไลต์ กล่าวโดยย่อ มีหลายวิธีในการวัดการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ ซึ่งแต่ละวิธีก็มีข้อดีและข้อเสียต่างกันไป ควรเลือกวิธีการตามความต้องการเฉพาะของงาน การทดลองนี้แนะนำวิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์ซึ่งมักใช้ในการผลิตและงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์เป็นหลัก
1. ข้อกำหนดวัตถุประสงค์
1. ชี้แจงหลักการนับด้วยกระดานนับเม็ดเลือด
2. ฝึกฝนวิธีการนับจุลินทรีย์โดยใช้บอร์ดนับเม็ดเลือด
2. หลักการพื้นฐาน
วิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์เป็นวิธีการที่ง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่าย โดยวางสารแขวนลอยของตัวอย่างจำนวนเล็กน้อยเพื่อทดสอบบนสไลด์พิเศษที่มีพื้นที่และปริมาตรที่กำหนด (หรือที่เรียกว่าเครื่องวัดแบคทีเรีย) แล้วนับสารดังกล่าวโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ วิธีการ ในปัจจุบัน เครื่องวัดแบคทีเรียที่ใช้กันทั่วไปทั้งในและต่างประเทศ ได้แก่ เครื่องวัดปริมาณเม็ดเลือด, เครื่องวัดแบคทีเรีย Peteroff-Hauser และเครื่องวัดแบคทีเรีย Hawksley ฯลฯ ทั้งหมดนี้สามารถใช้เพื่อนับยีสต์ แบคทีเรีย สปอร์ของเชื้อรา และสารแขวนลอยอื่นๆ ได้ โดยมีหลักการพื้นฐานที่เหมือนกัน เครื่องนับแบคทีเรียสองตัวหลังมีปริมาตรรวม 0.02 มม.3 หลังจากหุ้มด้วยกระจกครอบ และระยะห่างระหว่างกระจกครอบและสไลด์มีเพียง 0.02 มม. ดังนั้น เลนส์ใกล้วัตถุแบบแช่น้ำมันจึงสามารถใช้เพื่อสังเกตและตรวจจับเซลล์ขนาดเล็ก เช่น แบคทีเรีย ได้ นับ. นอกเหนือจากการใช้เครื่องวัดแบคทีเรียเหล่านี้แล้ว ยังมีวิธีการประมาณค่าที่สังเกตอัตราส่วนของพื้นที่สเมียร์โดยตรงต่อพื้นที่ลานสายตาภายใต้กล้องจุลทรรศน์ โดยทั่วไปวิธีนี้ใช้สำหรับการตรวจทางแบคทีเรียในนม ข้อดีของวิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์คือ ใช้งานง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่าย อย่างไรก็ตาม ข้อเสียของวิธีนี้คือผลที่วัดได้มักจะเป็นผลรวมของแบคทีเรียที่ตายแล้วและแบคทีเรียที่มีชีวิต ขณะนี้มีวิธีการบางอย่างที่จะเอาชนะข้อบกพร่องนี้ เช่น การรวมแบคทีเรียที่มีชีวิตซึ่งย้อมสีการเพาะเลี้ยงในห้องขนาดเล็ก (ในระยะเวลาอันสั้น) และการเพิ่มตัวยับยั้งการแบ่งเซลล์เพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ในการนับเฉพาะแบคทีเรียที่มีชีวิตเท่านั้น
การทดลองนี้ใช้ฮีโมไซโตมิเตอร์เป็นตัวอย่างในการนับโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ สำหรับการใช้เครื่องวัดแบคทีเรียอีกสองตัว โปรดดูคำแนะนำของผู้ผลิตแต่ละราย การนับโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยใช้เครื่องวัดเม็ดเลือดเป็นวิธีการแจกแจงจุลินทรีย์ที่ใช้กันทั่วไป บอร์ดนับเป็นสไลด์พิเศษที่มีสี่ร่องสร้างเป็นสามแพลตฟอร์ม แท่นที่กว้างขึ้นตรงกลางแบ่งออกเป็นสองซีกโดยมีร่องแนวนอนสั้น ๆ และมีตารางกริดที่แต่ละด้านของแท่น ตารางสี่เหลี่ยมแต่ละตารางแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่เก้าช่อง และสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ตรงกลางคือห้องนับ โครงสร้างของแผงนับเม็ดเลือดแสดงไว้ในรูปที่ {{0}} โดยทั่วไปมีข้อกำหนดสองประการสำหรับขนาดของห้องนับ หนึ่งคือสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่แบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดกลาง 25 ช่อง และแต่ละสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดกลางแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมจัตุรัสเล็ก 16 ช่อง (รูปที่ 15-2) อีกอันเป็นสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่ ตารางสี่เหลี่ยมแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมขนาดกลาง 16 ช่อง และแต่ละสี่เหลี่ยมขนาดกลางจะแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมเล็กๆ 25 ช่อง อย่างไรก็ตาม ไม่ว่าจะเป็นกระดานนับประเภทใดก็ตาม แต่ละช่องใหญ่แต่ละช่องจะมีสี่เหลี่ยมเล็กๆ 400 ช่อง ความยาวด้านของสี่เหลี่ยมจัตุรัสใหญ่แต่ละอันคือ lmm2 ดังนั้นพื้นที่ของสี่เหลี่ยมจัตุรัสใหญ่แต่ละอันคือ lmm2 หลังจากปิดฝาครอบสลิปแล้ว ความสูงระหว่างฝาครอบและสไลด์คือ 0.lmm ดังนั้นปริมาตรของห้องนับคือ 0.lmm3 (หนึ่งในหมื่นของมิลลิลิตร) รูปที่ 15-1 โครงสร้างของแผงนับเม็ดเลือด (1) รูปที่ 15-2 โครงสร้างของแผงนับเม็ดเลือด (2) A. มุมมองด้านหน้า; B. ส่วนตามยาว; ตารางสี่เหลี่ยมขยายใหญ่ สี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ตรงกลางเป็นห้องนับ 1. เซลล์นับเม็ดเลือด; 2. ใบปะหน้า; 3. เมื่อนับในห้องนับมักจะนับจำนวนแบคทีเรียทั้งหมดเป็น 5 ช่อง แล้วหาค่าเฉลี่ยของแต่ละช่องแล้วคูณด้วย 25 หรือ 16 เพื่อให้ได้จำนวนแบคทีเรียทั้งหมดในช่องสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แล้วจึงแปลง ลงในจำนวนแบคทีเรียทั้งหมดในสารละลายแบคทีเรีย 1 มิลลิลิตร สมมติว่าจำนวนแบคทีเรียทั้งหมดในสี่เหลี่ยมตรงกลางห้าช่องคือ A และปัจจัยการเจือจางของสารละลายแบคทีเรียคือ B หากเป็นจานนับที่มีสี่เหลี่ยมตรงกลาง 25 ช่อง แล้วจำนวนแบคทีเรียทั้งหมดใน 1 มล. ของสารละลายแบคทีเรีย {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (ชิ้น) ในทำนองเดียวกัน ถ้าเป็นจานนับที่มี 16 สี่เหลี่ยม จำนวนแบคทีเรียทั้งหมดในสารละลายแบคทีเรีย 1 มล. {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (ชิ้น),,
