ความแตกต่างระหว่างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์และกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดา
ความแตกต่างของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์และกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัลธรรมดา กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์และกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคอลธรรมดาจะแตกต่างกัน มันไม่ได้ผ่านการส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสงธรรมดาเพื่อสังเกตชิ้นงาน แต่ใช้ความยาวคลื่นบางอย่างของแสง (โดยปกติคืออัลตราไวโอเลต, น้ำเงินม่วง) การกระตุ้นของชิ้นงานภายใต้กล้องจุลทรรศน์ภายในวัสดุฟลูออเรสเซนต์เพื่อให้ปล่อยแสงฟลูออเรสเซนต์ ดังนั้นบทบาทของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ในแหล่งกำเนิดแสงจึงไม่ใช่แสงโดยตรง แต่เป็นการกระตุ้นชิ้นงานเรืองแสงจากภายในแสง แหล่งกำเนิดของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ไม่ใช่การส่องสว่างโดยตรง แต่เป็นแหล่งพลังงานในการกระตุ้นสารเรืองแสงภายในชิ้นงานทดสอบ เหตุผลที่เราสามารถสังเกตเห็นชิ้นงานทดสอบไม่ได้เกิดจากการส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสง แต่เป็นปรากฏการณ์เรืองแสงที่เกิดจากสารเรืองแสงในชิ้นงานหลังจากการดูดซับพลังงานแสงที่ตื่นเต้น จะเห็นได้ว่าลักษณะของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์นั้นโดยหลักแล้วแหล่งกำเนิดแสงสามารถจ่ายแสงกระตุ้นในช่วงความยาวคลื่นจำเพาะได้จำนวนมาก เพื่อให้สารฟลูออเรสเซนต์ภายในชิ้นงานที่ตรวจสอบสามารถรับความเข้มของแสงกระตุ้นที่จำเป็นได้ ในเวลาเดียวกัน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์จะต้องมีระบบกรองที่สอดคล้องกัน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เป็นเครื่องมือพื้นฐานสำหรับ **ฮิสโตเคมีของฟลูออเรสเซนซ์ ประกอบด้วยแหล่งกำเนิดแสงความดันสูงพิเศษ ระบบกรอง (รวมถึงแผ่นกรองการกระตุ้นและการปราบปราม) ระบบออปติคัลและระบบถ่ายภาพ และส่วนประกอบหลักอื่น ๆ คือการใช้ความยาวคลื่นของแสงเพื่อกระตุ้นชิ้นงานให้เปล่งแสงเรืองแสง
1. วิธีการกระตุ้นด้วยแสงฟลูออเรสเซนต์: ตามช่วงความยาวคลื่นของแสงแบ่งออกเป็นวิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวี (โดยใช้แสงอัลตราไวโอเลต) และวิธีการกระตุ้น BV (โดยใช้แสงสีม่วงสีน้ำเงิน) วิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวีสองแบบจะสั้นกว่า 400 นาโนเมตรใกล้กับแสงอัลตราไวโอเลตสำหรับ การกระตุ้น วิธีนี้ไม่มีแสงกระตุ้นที่มองเห็นได้ ดังนั้นการเรืองแสงที่สังเกตได้จะแสดงการเรืองแสงโดยธรรมชาติของสีย้อม และง่ายต่อการแยกแยะการเรืองแสงจำเพาะบนชิ้นงานทดสอบจากการเรืองแสงในตัวเองของเนื้อเยื่อพื้นหลัง
2. วิธีการกระตุ้น BV: วิธีการนี้มีศูนย์กลางอยู่ที่ 404 นาโนเมตร, 434 นาโนเมตรจากแสงอัลตราไวโอเลตไปจนถึงแสงสีน้ำเงินเพื่อการกระตุ้น วิธีนี้ใช้แสงสีน้ำเงินในการฉายรังสีชิ้นงาน ดังนั้นตัวกรองจุดตัดของระบบสังเกตการณ์ฟลูออเรสเซนซ์ต้องใช้ฟิลเตอร์ที่สามารถบังแสงสีน้ำเงินได้อย่างสมบูรณ์และผ่านแสงฟลูออเรสเซนต์สีเขียวและสีเหลืองที่ต้องการได้เต็มที่ เม็ดสีเรืองแสงสำหรับวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี เนื่องจากความยาวคลื่นของการดูดกลืนแสงสูงสุดของแสงกระตุ้นและความยาวคลื่นของการเปล่งแสงสูงสุดของฟลูออเรสเซนซ์นั้นอยู่ใกล้กัน ตัวกรองที่ใช้ในวิธีการกระตุ้น BV จึงต้องเป็นตัวกรองแบบตัดคม วิธีนี้ใช้แสงสีน้ำเงินเป็นแสงกระตุ้น ดังนั้นประสิทธิภาพการดูดกลืนแสงของฟลูออโรโครมจึงสูงขึ้นและได้ภาพที่สว่างยิ่งขึ้น ข้อเสียคือไม่สามารถมองเห็นแสงเรืองแสงที่ต่ำกว่า 500 นาโนเมตร และที่สูงกว่า 500 นาโนเมตร ภาพทั้งหมดจะปรากฏเป็นสีเหลือง ในวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี ความจำเพาะส่วนใหญ่จะตัดสินโดยสีที่เป็นเอกลักษณ์ของฟลูออโรโครม ดังนั้นข้อเสียของวิธีการกระตุ้น BV ที่อธิบายไว้ข้างต้นมีแนวโน้มที่จะมีอิทธิพลอย่างมากเมื่อพูดถึงความจำเพาะที่ละเอียดอ่อน
