ความแตกต่างและลักษณะของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์และกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดา
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์และกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัลธรรมดานั้นแตกต่างกัน โดยไม่ได้ผ่านการส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสงธรรมดาเพื่อสังเกตชิ้นงาน แต่ใช้การกระตุ้นของวัสดุฟลูออเรสเซนต์ภายในชิ้นงานด้วยความยาวคลื่นบางอย่าง (โดยปกติคือแสงอัลตราไวโอเลต แสงสีน้ำเงินม่วง) ใต้กล้องจุลทรรศน์ เพื่อให้การเรืองแสงของแหล่งกำเนิดแสงกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ไม่เล่นการส่องสว่างโดยตรง แต่เป็นการกระตุ้นของวัสดุเรืองแสงภายในตัวอย่างของแหล่งพลังงาน เหตุผลที่เราสามารถสังเกตเห็นชิ้นงานทดสอบไม่ได้เกิดจากการส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสง แต่เป็นปรากฏการณ์การเรืองแสงที่เกิดจากวัสดุฟลูออเรสเซนต์ในชิ้นงานหลังจากการดูดซับพลังงานแสงของการกระตุ้น จะเห็นได้ว่าลักษณะของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ ซึ่งส่วนใหญ่เป็นแหล่งกำเนิดแสงสามารถจ่ายช่วงความยาวคลื่นจำเพาะของแสงกระตุ้นได้จำนวนมาก เพื่อให้วัสดุฟลูออเรสเซนต์ภายในชิ้นงานที่ตรวจสอบสามารถรับความเข้มที่จำเป็นของแสงกระตุ้นได้ ในเวลาเดียวกัน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์จะต้องมีระบบกรองที่สอดคล้องกัน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เป็นเครื่องมือพื้นฐานสำหรับฮิสโตเคมีของฟลูออเรสเซนซ์ ประกอบด้วยแหล่งกำเนิดแสงความดันสูงพิเศษ ระบบกรอง (รวมถึงแผ่นกรองการกระตุ้นและการปราบปราม) ระบบออปติคัลและระบบถ่ายภาพ และส่วนประกอบหลักอื่น ๆ คือการใช้ความยาวคลื่นของแสงเพื่อกระตุ้นชิ้นงานให้เปล่งแสงเรืองแสง
1. วิธีการกระตุ้นด้วยแสงฟลูออเรสเซนต์: ตามช่วงความยาวคลื่นของแสงแบ่งออกเป็นวิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวี (โดยใช้แสงอัลตราไวโอเลต) และวิธีการกระตุ้น BV (โดยใช้แสงสีม่วงสีน้ำเงิน) วิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวีสองแบบจะสั้นกว่า 400 นาโนเมตรใกล้กับแสงอัลตราไวโอเลตสำหรับ การกระตุ้น วิธีนี้ไม่มีแสงกระตุ้นที่มองเห็นได้ ดังนั้นการเรืองแสงที่สังเกตได้จะแสดงการเรืองแสงโดยธรรมชาติของสีย้อม และง่ายต่อการแยกแยะการเรืองแสงจำเพาะบนชิ้นงานทดสอบจากการเรืองแสงในตัวเองของเนื้อเยื่อพื้นหลัง
2. วิธีการกระตุ้น BV: วิธีการนี้มีศูนย์กลางอยู่ที่ 404 นาโนเมตร, 434 นาโนเมตรจากแสงอัลตราไวโอเลตไปจนถึงแสงสีน้ำเงินเพื่อการกระตุ้น วิธีนี้ใช้แสงสีน้ำเงินในการฉายรังสีชิ้นงาน ดังนั้นตัวกรองจุดตัดของระบบสังเกตการณ์ฟลูออเรสเซนซ์ต้องใช้ฟิลเตอร์ที่สามารถปิดกั้นแสงสีน้ำเงินได้อย่างสมบูรณ์และสามารถผ่านแสงเรืองแสงสีเขียวและสีเหลืองที่ต้องการได้อย่างเพียงพอ เม็ดสีเรืองแสงสำหรับวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี เนื่องจากความยาวคลื่นของการดูดกลืนแสงสูงสุดของแสงกระตุ้นและความยาวคลื่นของการเปล่งแสงสูงสุดของฟลูออเรสเซนซ์นั้นอยู่ใกล้กัน ตัวกรองที่ใช้ในวิธีการกระตุ้น BV จึงต้องเป็นตัวกรองแบบตัดคม วิธีนี้ใช้แสงสีน้ำเงินเป็นแสงกระตุ้น ดังนั้นประสิทธิภาพการดูดกลืนแสงของฟลูออโรโครมจึงสูงขึ้นและได้ภาพที่สว่างยิ่งขึ้น ข้อเสียคือไม่สามารถมองเห็นแสงเรืองแสงที่ต่ำกว่า 500 นาโนเมตร และที่สูงกว่า 500 นาโนเมตร ภาพทั้งหมดจะปรากฏเป็นสีเหลือง ในวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี ความจำเพาะส่วนใหญ่จะตัดสินโดยสีเฉพาะของฟลูออโรโครม ดังนั้นข้อเสียของวิธีการกระตุ้น BV ที่อธิบายไว้ข้างต้นมีแนวโน้มที่จะมีอิทธิพลอย่างมากเมื่อพูดถึงความจำเพาะที่ละเอียดอ่อน
