ความรู้ที่เกี่ยวข้องกับกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
หลักการพื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์คอนโฟคอล: แหล่งกำเนิดแสงแบบจุดถูกใช้เพื่อฉายรังสีชิ้นงาน และจุดแสงขนาดเล็กที่กำหนดไว้อย่างดีจะเกิดขึ้นบนระนาบโฟกัส ประกอบด้วยตัวแยก ตัวแยกลำแสงจะส่งสารเรืองแสงไปยังเครื่องตรวจจับโดยตรง มีรูเข็มอยู่ด้านหน้าของแหล่งกำเนิดแสงและตัวตรวจจับ ซึ่งเรียกว่ารูเข็มส่องสว่างและรูเข็มตรวจจับตามลำดับ ขนาดทางเรขาคณิตของทั้งสองเท่ากัน คือประมาณ 100-200nm; เมื่อเทียบกับจุดแสงบนระนาบโฟกัส ทั้งสองจะเชื่อมโยงกัน กล่าวคือ จุดแสงจะผ่านชุดเลนส์ และสุดท้ายสามารถโฟกัสไปที่รูเข็มส่องสว่างและรูเข็มตรวจจับได้พร้อมกัน ด้วยวิธีนี้ แสงจากระนาบโฟกัสสามารถรวมกันอยู่ภายในขอบเขตของรูตรวจจับ ในขณะที่แสงที่กระจัดกระจายจากด้านบนหรือด้านล่างของระนาบโฟกัสจะถูกบังไว้นอกรูตรวจจับและไม่สามารถถ่ายภาพได้ เลเซอร์จะสแกนตัวอย่างทีละจุด และหลอดโฟโตมัลติพลายเออร์หลังจากตรวจพบรูเข็มแล้ว ยังได้รับภาพคอนโฟคอลของจุดแสงที่สอดคล้องกันทีละจุด ซึ่งจะถูกแปลงเป็นสัญญาณดิจิทัลและส่งไปยังคอมพิวเตอร์ และสุดท้ายจะรวมเข้าด้วยกันเป็นที่ชัดเจน ภาพคอนโฟคอลของระนาบโฟกัสทั้งหมดบนหน้าจอ
ภาพระนาบโฟกัสแต่ละภาพเป็นภาพตัดขวางเชิงแสงของชิ้นงานทดสอบ และภาพตัดขวางเชิงแสงนี้จะมีความหนาที่แน่นอนเสมอ หรือที่เรียกว่าภาพตัดขวางแบบบาง เนื่องจากความเข้มของแสงที่จุดโฟกัสจะมากกว่าที่จุดที่ไม่ได้โฟกัสมาก และแสงระนาบที่ไม่โฟกัสจะถูกกรองโดยรูเข็ม ระยะชัดลึกของระบบคอนโฟคอลจึงอยู่ที่ประมาณศูนย์ และการสแกนตามแนว Z - แกนสามารถรับการตรวจเอกซเรย์ด้วยแสงโดยสร้างส่วนออปติคอลสองมิติที่จุดโฟกัสของตัวอย่าง เมื่อรวมการสแกนระนาบ XY (ระนาบโฟกัส) เข้ากับการสแกนแกน Z (แกนออปติคอล) จะได้ภาพสามมิติของตัวอย่างโดยการรวบรวมภาพสองมิติของเลเยอร์ต่อเนื่องและประมวลผลด้วยซอฟต์แวร์คอมพิวเตอร์พิเศษ
นั่นคือ รูเข็มตรวจจับและรูเข็มแหล่งกำเนิดแสงจะโฟกัสที่จุดเดียวกันเสมอ ดังนั้นสารเรืองแสงที่กระตุ้นภายนอกระนาบโฟกัสจึงไม่สามารถเข้าไปในรูเข็มตรวจจับได้
หลักการทำงานของคอนโฟคอลแบบง่ายๆ คือใช้แสงเลเซอร์เป็นแหล่งกำเนิดแสง บนพื้นฐานของการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบดั้งเดิม จะเพิ่มอุปกรณ์การสแกนด้วยเลเซอร์และอุปกรณ์โฟกัสแบบคอนจูเกต และเป็นระบบสำหรับการรับและประมวลผลภาพดิจิทัลผ่านการควบคุมของคอมพิวเตอร์
