วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์และข้อควรระวัง
วิธีใช้:
(1) วางแผ่นวัสดุบนแท่นขนส่ง
(2) เปิดสวิตช์ควบคุมแรงดันไฟฟ้าของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง จากนั้นกดกลุ่มเริ่มต้นเพื่อจุดไฟหลอด UV จะต้องไม่ปิดเป็นเวลา 15 นาที และจะต้องไม่รีสตาร์ทเป็นเวลา 3 นาทีหลังจากปิด
(3) เปลี่ยนตัวกรองการกระตุ้นเป็น v, ฟิล์ม dichroic เป็น v, เลือกตัวกรองการบล็อก 495 หรือ 475nm
(4) เลือกกล้องจุลทรรศน์เลนส์ใกล้วัตถุ uvFL40, uvFL100 เรืองแสง
(5) เติมน้ำมันที่ไม่เรืองแสงบนสไลด์ 40 x แรก จากนั้นจึงใช้กล้องจุลทรรศน์โฟกัส 100 x แสดงการเรืองแสง
(7) เนื่องจากวัสดุเรืองแสงโดยการฉายรังสีอัลตราไวโอเลตพร้อมกับการเติบโตของเรืองแสงจะค่อยๆอ่อนลงเมื่อเวลาผ่านไป ดังนั้นการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์จึงควรเปลี่ยนมุมมองบ่อยครั้ง
(8) สามารถใช้วัสดุกล้องจุลทรรศน์กำลังขยายต่ำ uvFL10 หรือ uvFL20 ได้ (ที่มีกำลังขยายต่ำโดยไม่ต้องเติมน้ำมันที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์)
วิธีการบันทึกภาพเรืองแสง:
ภาพเรืองแสงที่มองเห็นด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ภาพหนึ่งมีลักษณะทางสัณฐานวิทยา ภาพที่สองคือสีและความสว่างของแสงเรืองแสง ในการตัดสินผลลัพธ์ ทั้งสองจะต้องรวมกับการตัดสินที่ครอบคลุม ผลลัพธ์จะถูกบันทึกตามตัวบ่งชี้เชิงอัตนัย เช่น โดยการสังเกตด้วยสายตาของผู้ปฏิบัติงาน จากการสังเกตเชิงคุณภาพทั่วไป น่าเชื่อถือโดยทั่วไป ด้วยการพัฒนาของเทคโนโลยีและวิทยาศาสตร์ในระดับที่แตกต่างกัน การใช้ตัวบ่งชี้วัตถุประสงค์ในการบันทึกผลการตัดสิน เช่น การใช้เซลล์สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ เครื่องวิเคราะห์ภาพ และเครื่องมืออื่นๆ อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ที่บันทึกโดยเครื่องมือเหล่านี้จะต้องรวมกับการตัดสินแบบอัตนัยด้วย
เทคโนโลยีการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์มีความจำเป็นอย่างมากในการบันทึกภาพเรืองแสง เนื่องจากแสงฟลูออเรสเซนต์จะจางลงและอ่อนลงได้ง่าย เพื่อบันทึกผลการถ่ายภาพได้ทันที โดยพื้นฐานแล้ววิธีการนี้เหมือนกับการถ่ายภาพไมโครกราฟีแบบธรรมดา เพียงแค่ต้องใช้ฟิล์มถ่ายภาพความเร็วสูง เช่น ASA200 ขึ้นไป หรือ 24. ขึ้นไป เนื่องจากแสงอัลตราไวโอเลตบนเอฟเฟกต์การระเบิดของฟลูออเรสเซนซ์ เช่น เครื่องหมาย FITC ในการฉายรังสีอัลตราไวโอเลต 30 วินาที ความสว่างของฟลูออเรสเซนต์ลดลง 50% ดังนั้นความเร็วของการเปิดรับแสงจึงช้าเกินกว่าจะจับภาพเรืองแสงได้ กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงสำหรับการวิจัยทั่วไปมีอุปกรณ์ระบบการถ่ายภาพไมโครแบบกึ่งอัตโนมัติหรืออัตโนมัติเต็มรูปแบบ
ข้อควรระวัง:
(1) ดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามข้อกำหนดของคู่มือโรงงานกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ อย่าเปลี่ยนขั้นตอนโดยพลการ
(2) การตรวจสอบควรดำเนินการในห้องมืด หลังจากเข้าไปในห้องมืด ให้เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟ จากนั้นจุดไฟปรอทความดันสูงพิเศษเป็นเวลา 5-15 นาที รอจนกว่าแหล่งกำเนิดแสงจะปล่อยแสงจ้าออกมาเพื่อให้คงที่ และดวงตาจะปรับให้เข้ากับห้องมืดอย่างสมบูรณ์ และ จากนั้นจึงเริ่มสังเกตตัวอย่าง
(3) เพื่อป้องกันความเสียหายต่อดวงตาจากแสงอัลตราไวโอเลต ควรสวมแว่นตาป้องกันเมื่อปรับแหล่งกำเนิดแสง
(4) ตรวจสอบเวลาแต่ละครั้งเป็นเวลา 1 ~ 2 ชั่วโมงมีความเหมาะสม มากกว่า 90 นาที ความเข้มของการส่องสว่างของหลอดปรอทแรงดันสูงพิเศษค่อยๆ ลดลง การเรืองแสงอ่อนลง ตัวอย่างที่ฉายรังสีด้วยแสงอัลตราไวโอเลต 3 ~ 5 นาที การเรืองแสงก็ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเช่นกัน ดังนั้น * จะต้องไม่เกิน 2 ~ 3 ชม.
(5) อายุการใช้งานของแหล่งกำเนิดแสงกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์มีจำกัด ชิ้นงานควรได้รับการตรวจสอบจากส่วนกลาง เพื่อประหยัดเวลาและปกป้องแหล่งกำเนิดแสง เมื่อร้อนควรเพิ่มพัดลมระบายความร้อนควรบันทึกหลอดไฟใหม่ตั้งแต่เริ่มใช้งาน เมื่อหลอดไฟดับและต้องการใช้อีกครั้ง หลอดไฟจะต้องได้รับความเย็นเพียงพอก่อนจะส่องสว่าง ควรหลีกเลี่ยงแหล่งกำเนิดแสงหลายครั้ง
(6) สังเกตตัวอย่างทันทีหลังจากการย้อมสี เนื่องจากแสงเรืองแสงจะค่อยๆ ลดลงเมื่อเวลาผ่านไป หากวางชิ้นงานทดสอบในถุงพลาสติกโพลีเอทิลีนที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศา อาจทำให้การเรืองแสงอ่อนตัวลงและป้องกันการระเหยของสารปิดผนึกได้
(7) เกณฑ์การตัดสินสำหรับความสว่างของฟลูออเรสเซนต์: โดยทั่วไปแบ่งออกเป็นสี่ระดับ นั่นคือ 'หนึ่ง' - ไม่มีหรือเรืองแสงอ่อนที่มองเห็นได้ '+' - มีเพียงแสงเรืองแสงที่มองเห็นได้ชัดเจนเท่านั้น '+ +' - มองเห็นได้ด้วยความสว่าง
