วิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เป็นเครื่องมือพื้นฐานสำหรับเซลล์เคมีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ ประกอบด้วยส่วนประกอบหลัก เช่น แหล่งกำเนิดแสง ระบบแผ่นกรอง และระบบออปติคอล ใช้ความยาวคลื่นของแสงเพื่อกระตุ้นชิ้นงานและปล่อยแสงเรืองแสง ซึ่งขยายผ่านวัตถุประสงค์และระบบช่องมองภาพเพื่อสังเกตภาพเรืองแสงของชิ้นงานทดสอบ (รูปที่ 1)
(1) แหล่งกำเนิดแสง
ปัจจุบันหลอดปรอทความดันสูงพิเศษ 200W มักใช้เป็นแหล่งกำเนิดแสง ทำจากแก้วควอทซ์ มีรูปร่างเป็นทรงกลมตรงกลางและมีสารปรอทจำนวนหนึ่งบรรจุอยู่ด้านใน ในระหว่างการทำงาน การปล่อยประจุระหว่างอิเล็กโทรดทั้งสองจะทำให้ปรอทระเหย และความดันภายในทรงกลมจะเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว เมื่อปรอทระเหยจนหมด จะสามารถเข้าถึงความดันบรรยากาศมาตรฐานได้ 50-70 ซึ่งโดยทั่วไปจะใช้เวลาประมาณ 5-15 นาที การเรืองแสงของหลอดปรอทความดันสูงพิเศษเป็นผลมาจากการปล่อยประจุระหว่างอิเล็กโทรด ซึ่งจะแยกตัวและลดโมเลกุลของปรอทอย่างต่อเนื่อง และปล่อยโฟตอนออกมา มันปล่อยแสงอัลตราไวโอเลตที่รุนแรงและแสงสีม่วงสีน้ำเงิน ซึ่งเพียงพอที่จะกระตุ้นสารเรืองแสงต่างๆ ดังนั้นจึงมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
ข้อควรระวังในการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์
(1) ปฏิบัติตามคำแนะนำของโรงงานกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์อย่างเคร่งครัด และอย่าเปลี่ยนโปรแกรมโดยพลการ
(2) การตรวจสอบควรดำเนินการในห้องมืด หลังจากเข้าไปในห้องมืด ให้เชื่อมต่อปลั๊กไฟและจุดไฟปรอทความดันสูงพิเศษเป็นเวลา 5-15 นาที หลังจากที่แหล่งกำเนิดแสงฉายแสงจ้าและคงที่แล้ว ดวงตาควรปรับให้เข้ากับห้องมืดได้เต็มที่ก่อนที่จะเริ่มสังเกตชิ้นงาน
(3) เพื่อป้องกันความเสียหายจากรังสียูวีต่อดวงตา ควรสวมแว่นตาป้องกันเมื่อปรับแหล่งกำเนิดแสง
(4) เวลาในการตรวจสอบควรเป็น 1-2 ชั่วโมงในแต่ละครั้ง หากเกิน 90 นาที ความเข้มของการส่องสว่างของหลอดปรอทความดันสูงพิเศษจะค่อยๆ ลดลง และการเรืองแสงจะอ่อนลง ตัวอย่างที่ได้รับรังสีอัลตราไวโอเลตเป็นเวลา 3-5 วัน
หลังจากนาที การเรืองแสงก็ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเช่นกัน ดังนั้น ระยะเวลาสูงสุดไม่ควรเกิน 2-3 ชั่วโมง
(5) อายุการใช้งานของแหล่งกำเนิดแสงกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์มีจำกัด และควรตรวจสอบชิ้นงานจากส่วนกลางเพื่อประหยัดเวลา
ประหยัดเวลาและปกป้องแหล่งกำเนิดแสง เมื่ออากาศร้อนควรเพิ่มพัดลมไฟฟ้าเพื่อกระจายความร้อนและความเย็น เมื่อเปลี่ยนหลอดไฟใหม่ควรบันทึกระยะเวลาการใช้งานไว้ตั้งแต่ต้น เมื่อปิดไฟแล้วต้องการใช้อีกครั้งต้องรอให้หลอดไฟเย็นเพียงพอจึงจะจุดไฟได้ หลีกเลี่ยงการให้แสงสว่างแก่แหล่งกำเนิดแสงหลายครั้งต่อวัน
(6) สังเกตตัวอย่างทันทีหลังจากการย้อมสี เนื่องจากแสงฟลูออเรสเซนต์จะค่อยๆ ลดลงเมื่อเวลาผ่านไป หากเก็บชิ้นงานทดสอบไว้ในถุงพลาสติกโพลีเอทิลีนที่อุณหภูมิ 4 องศา อาจทำให้เวลาการลดทอนของฟลูออเรสเซนซ์ช้าลงและป้องกันการระเหยของสารยึดติด
(7) เกณฑ์การตัดสินสำหรับความสว่างของฟลูออเรสเซนต์โดยทั่วไปจะแบ่งออกเป็นสี่ระดับ ได้แก่ "หนึ่ง" - ไม่มีหรือเรืองแสงอ่อนที่มองเห็นได้ "+" - มองเห็นได้เฉพาะแสงฟลูออเรสเซนต์ที่มองเห็นได้ ++- มองเห็นได้ด้วยแสงเรืองแสงที่สดใส "+++" - แสงเรืองแสงที่มองเห็นได้และพราว
