Fluorescence Microscopy แตกต่างจาก Confocal Laser Microscopy อย่างไร
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
1. กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้แสงอัลตราไวโอเลตเป็นแหล่งกำเนิดแสงเพื่อส่องวัตถุที่กำลังตรวจสอบให้เปล่งแสงฟลูออเรสเซนซ์ จากนั้นสังเกตรูปร่างและตำแหน่งของวัตถุที่อยู่ใต้กล้องจุลทรรศน์ กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้เพื่อศึกษาการดูดซึมและการลำเลียงสารภายในเซลล์ ตลอดจนการกระจายตัวและตำแหน่งของสารเคมี สารบางชนิดในเซลล์ เช่น คลอโรฟิลล์ สามารถเรืองแสงได้หลังจากถูกฉายรังสีอัลตราไวโอเลต สารบางชนิดไม่สามารถเรืองแสงได้ แต่หากเปื้อนด้วยสีย้อมเรืองแสงหรือแอนติบอดีเรืองแสง สารเหล่านั้นสามารถเรืองแสงได้หลังจากการฉายรังสีด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เป็นเครื่องมือหนึ่งสำหรับการวิจัยเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณเกี่ยวกับสารดังกล่าว
2. หลักการของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง:
(A) แหล่งกำเนิดแสง: แหล่งกำเนิดแสงจะฉายแสงที่มีความยาวคลื่นต่างๆ (ตั้งแต่อัลตราไวโอเลตไปจนถึงอินฟราเรด)
(B) แหล่งกำเนิดแสงจากฟิลเตอร์กระตุ้น: ส่งแสงที่มีความยาวคลื่นจำเพาะที่สามารถทำให้ชิ้นงานเรืองแสงได้ ขณะเดียวกันก็ปิดกั้นแสงที่ไม่มีประโยชน์ในการกระตุ้นการเรืองแสง
(C) ตัวอย่างฟลูออเรสเซนต์: โดยทั่วไปจะย้อมด้วยเม็ดสีเรืองแสง
(D) ตัวกรองการปิดกั้น: ปิดกั้นแสงกระตุ้นที่ชิ้นงานไม่ถูกดูดซับและเลือกส่งผ่านแสงเรืองแสง ความยาวคลื่นบางส่วนในการเรืองแสงก็จะถูกส่งผ่านแบบคัดเลือกเช่นกัน กล้องจุลทรรศน์ที่ใช้แสงอัลตราไวโอเลตเป็นแหล่งกำเนิดแสงเพื่อทำให้วัตถุที่ส่องสว่างเรืองแสง กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนถูกประกอบครั้งแรกในปี พ.ศ. 2474 ในกรุงเบอร์ลิน ประเทศเยอรมนี โดยคนอร์และฮอลโลว์สกา กล้องจุลทรรศน์นี้ใช้ลำอิเล็กตรอนความเร็วสูงแทนลำแสง เนื่องจากความยาวคลื่นของการไหลของอิเล็กตรอนสั้นกว่าแสงมาก กำลังขยายของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนจึงสามารถถึง 800,000 เท่า และขีดจำกัดความละเอียดขั้นต่ำคือ 0.2 นาโนเมตร กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราดซึ่งเริ่มใช้ในปี พ.ศ. 2506 ช่วยให้ผู้คนมองเห็นโครงสร้างเล็กๆ บนพื้นผิวของวัตถุ
3. ขอบเขตการใช้งาน: ใช้เพื่อขยายภาพของวัตถุขนาดเล็ก โดยทั่วไปใช้ในการสังเกตชีววิทยา การแพทย์ อนุภาคขนาดเล็กมาก ฯลฯ
กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอล
1. กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลจะเพิ่มเลนส์กึ่งสะท้อนแสงกึ่งสะท้อนแสงให้กับเส้นทางแสงของแสงสะท้อน ซึ่งจะหักเหแสงสะท้อนที่ผ่านเลนส์ไปยังทิศทางอื่น มีแผ่นกั้นที่มีรูเข็มอยู่ที่โฟกัส และรูเข็มตั้งอยู่ ที่จุดโฟกัส ด้านหลังแผ่นกั้นคือหลอดโฟโตมัลติพลายเออร์ สามารถจินตนาการได้ว่าแสงสะท้อนก่อนและหลังโฟกัสของแสงตรวจจับจะผ่านระบบคอนโฟคอลนี้ และไม่สามารถโฟกัสไปที่รูเล็กๆ ได้ และจะถูกบล็อกโดยแผ่นกั้น ดังนั้นสิ่งที่โฟโตมิเตอร์วัดคือความเข้มของแสงสะท้อนที่โฟกัส
2. หลักการ: กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงแบบดั้งเดิมใช้แหล่งกำเนิดแสงจากสนาม และภาพของแต่ละจุดบนชิ้นงานทดสอบจะถูกรบกวนโดยการเลี้ยวเบนหรือแสงที่กระเจิงจากจุดที่อยู่ติดกัน กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลสแกนด้วยเลเซอร์ใช้ลำแสงเลเซอร์เพื่อสร้างแหล่งกำเนิดแสงแบบจุดผ่านรูเข็มส่องสว่างเพื่อให้แสงสว่างภายในชิ้นงาน แต่ละจุดของระนาบโฟกัสจะถูกสแกน และจุดที่ส่องสว่างบนชิ้นงานทดสอบจะถูกถ่ายภาพที่รูเข็มการตรวจจับ ซึ่งได้รับการรับทีละจุดหรือทีละบรรทัดโดยหลอดโฟโตมัลติพลายเออร์ (PMT) หรืออุปกรณ์เชื่อมต่อความเย็น (cCCD) ที่อยู่เบื้องหลังการตรวจจับ รูเข็มและรวดเร็ว เกิดภาพเรืองแสงขึ้นบนหน้าจอคอมพิวเตอร์ รูเข็มรับแสงและรูเข็มตรวจจับจะเชื่อมต่อกันโดยสัมพันธ์กับระนาบโฟกัสของเลนส์ใกล้วัตถุ จุดบนระนาบโฟกัสจะโฟกัสไปที่รูเข็มการส่องสว่างและรูเข็มที่ปล่อยแสงในเวลาเดียวกัน จุดที่อยู่นอกระนาบโฟกัสจะไม่ถูกถ่ายภาพที่รูเข็มการตรวจจับ ภาพที่ได้รับ Confocal เป็นส่วนตัดขวางทางแสงของชิ้นงานทดสอบ เพื่อเอาชนะข้อบกพร่องของภาพที่พร่ามัวในกล้องจุลทรรศน์ธรรมดา
3. สาขาการสมัคร: เกี่ยวข้องกับการแพทย์ การวิจัยทางวิทยาศาสตร์ในสัตว์และพืช ชีวเคมี แบคทีเรียวิทยา ชีววิทยาของเซลล์ วิทยาตัวอ่อนของเนื้อเยื่อ วิทยาศาสตร์การอาหาร พันธุศาสตร์ เภสัชวิทยา สรีรวิทยา ทัศนศาสตร์ พยาธิวิทยา พฤกษศาสตร์ ประสาทวิทยาศาสตร์ ชีววิทยาทางทะเล และวัสดุศาสตร์ วิทยาศาสตร์อิเล็กทรอนิกส์ ,กลศาสตร์,ธรณีวิทยาปิโตรเลียม,แร่วิทยา.
