จะเลือกอย่างไรระหว่างกล้องจุลทรรศน์แบบหัวกลับและกล้องจุลทรรศน์แบบเรืองแสง?
ในการเพาะเลี้ยงเซลล์และการทดลองอนุพันธ์ที่เกี่ยวข้อง กล้องจุลทรรศน์เป็นเครื่องมือที่สำคัญมาก ในปัจจุบันมีกล้องจุลทรรศน์หลายประเภทในท้องตลาด เป็นเรื่องท้าทายในการเลือกกล้องจุลทรรศน์ที่ตรงตามความต้องการและเหมาะสม ต่อไปนี้เป็นคำแนะนำเบื้องต้นเกี่ยวกับหลักการของกล้องจุลทรรศน์หัวกลับและกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ เพื่อให้คุณสามารถเลือกได้อย่างง่ายดาย
ส่วนประกอบของกล้องจุลทรรศน์กลับหัวจะเหมือนกับของกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป ส่วนใหญ่ประกอบด้วยสามส่วน: ส่วนเชิงกล ส่วนแสง และส่วนแสง องค์ประกอบของกล้องจุลทรรศน์กลับด้านจะเหมือนกับของกล้องจุลทรรศน์ตั้งตรงทั่วไป ยกเว้นว่าเลนส์ใกล้วัตถุและระบบส่องสว่างจะกลับด้าน โดยอันแรกอยู่ใต้แท่น และอันหลังอยู่เหนือแท่น โครงสร้างดังกล่าวสามารถขยายระยะห่างที่มีประสิทธิภาพระหว่างระบบรวมแสงกับเวทีได้อย่างมาก ซึ่งสะดวกสำหรับการวางวัตถุที่หนาขึ้นเพื่อให้สังเกตได้ เช่น จานเพาะเชื้อและขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ (แน่นอนว่ามีสไลด์แก้ว ฯลฯ ด้วย) และในขณะเดียวกันระยะห่างระหว่างเลนส์ใกล้วัตถุกับวัสดุ ระยะการทำงานระหว่างเลนส์ทั้งสองนั้นไม่จำเป็นต้องมาก กล้องจุลทรรศน์หัวกลับใช้สำหรับการสังเกตจุลินทรีย์ เซลล์ แบคทีเรีย การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ สารแขวนลอย ตะกอน ฯลฯ ในหน่วยแพทย์และสุขภาพ สถาบันอุดมศึกษา และสถาบันวิจัย สามารถสังเกตกระบวนการสืบพันธุ์และการแบ่งตัวของเซลล์ แบคทีเรีย ฯลฯ ในอาหารเลี้ยงเชื้อได้อย่างต่อเนื่อง และสามารถถ่ายภาพรูปแบบใดก็ได้ในกระบวนการ มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านเซลล์วิทยา ปรสิตวิทยา เนื้องอกวิทยา ภูมิคุ้มกันวิทยา พันธุวิศวกรรม จุลชีววิทยาอุตสาหกรรม พฤกษศาสตร์ และสาขาอื่นๆ
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้เพื่อศึกษาการดูดซับและการขนส่งสารในเซลล์ การกระจายและตำแหน่งที่ตั้งของสารเคมี เป็นต้น สำหรับวัตถุที่ตรวจสอบ มีสองวิธีในการสร้างการเรืองแสง: การเรืองแสงอัตโนมัติ ซึ่งจะปล่อยการเรืองแสงโดยตรงหลังจากฉายรังสีด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต แสงสว่าง; สารบางชนิดในเซลล์ เช่น คลอโรฟิลล์ จะผลิตสารเรืองแสงอัตโนมัติหลังจากถูกฉายรังสีอัลตราไวโอเลต แม้ว่าสารบางชนิดจะไม่สามารถเรืองแสงได้ แต่ก็สามารถเปล่งแสงทุติยภูมิได้หลังจากถูกย้อมด้วยสีย้อมเรืองแสงหรือแอนติบอดีเรืองแสงหลังจากฉายรังสีอัลตราไวโอเลต กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ใช้แหล่งกำเนิดแสงแบบจุดที่มีประสิทธิภาพการส่องสว่างสูงเพื่อปล่อยแสงที่มีความยาวคลื่นหนึ่ง (แสงอุลตราไวโอเลต 365 นาโนเมตรหรือแสงสีน้ำเงินม่วง 420 นาโนเมตร) ผ่านระบบกรองเป็นแสงกระตุ้น และหลังจากกระตุ้นสารเรืองแสงในชิ้นงานเพื่อเปล่งแสงเรืองแสงต่างๆ สี จากนั้นทำการสังเกตผ่านการขยายของเลนส์ใกล้วัตถุและเลนส์ใกล้ตา ด้วยวิธีนี้ ภายใต้พื้นหลังที่มีคอนทราสต์สูง แม้ว่าฟลูออเรสเซนซ์จะอ่อนมาก แต่ก็สามารถระบุได้ง่ายและมีความไวสูง ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการวิจัยโครงสร้างและหน้าที่ของเซลล์และองค์ประกอบทางเคมี
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบ่งออกเป็นประเภทการส่งผ่านและประเภทการดีดออกของอีพี โดยแบบแรกนั้นดั้งเดิมกว่าและแบบหลังนั้นก้าวหน้ากว่า โครงสร้างพื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ทั้งสองประเภทมีความคล้ายคลึงกัน ความแตกต่างหลักคือ: แสงกระตุ้นของชนิดส่งผ่านผ่านชิ้นงานทดสอบ และชิ้นงานทั้งหมดสร้างการเรืองแสง ซึ่งจากนั้นจะเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุ ยิ่งกำลังขยายสูงเท่าใด แสงกระตุ้นของประเภทการปล่อยอีพิจะฉายลงบนพื้นผิวของชิ้นงานทดสอบ พื้นผิวของชิ้นงานจะผลิตสารเรืองแสง และสารเรืองแสงจะเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุอีกครั้ง ยิ่งกำลังขยายสูงเท่าใด ฟลูออเรสเซนต์ก็ยิ่งแรงขึ้นเท่านั้น ซึ่งเหมาะสำหรับการสังเกตการณ์ด้วยกำลังขยายสูง ส่วนประกอบหลักของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ประกอบด้วยแหล่งกำเนิดแสงจากหลอดปรอท แผ่นกรองการกระตุ้น กระจกไดโครอิก (ชนิดตอน) แผ่นกรองแบบกด และคอนเดนเซอร์สนามมืด (ชนิดการส่งผ่าน) เป็นต้น นอกจากนี้ เนื่องจาก หลอดไฟปรอทให้ความร้อนสูง ส่วนใหญ่ติดตั้งตัวกรองดูดซับความร้อน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนส์บางรุ่นยังมีวัตถุประสงค์ของเฟสคอนทราสต์และไดอะแฟรมรูปวงแหวน ดังนั้นจึงสามารถสังเกตคอนทราสต์ของเฟสได้ นอกจากนี้ยังมีกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ที่ใช้โครงสร้างกลับด้าน กล้องจุลทรรศน์กลับด้านอีกแบบหนึ่ง และอื่นๆ
นอกจากนี้ กล้องจุลทรรศน์ที่กล่าวถึงข้างต้นยังสามารถประกอบเป็นกล้องจุลทรรศน์ดิจิทัลได้โดยการติดตั้ง CCD ซึ่งจะแปลงภาพทางกายภาพที่กล้องจุลทรรศน์มองเห็นเป็นภาพบนคอมพิวเตอร์ผ่านการแปลงสัญญาณดิจิทัลเป็นแอนะล็อก ดังนั้นเราจึงสามารถเปลี่ยนการวิจัยเกี่ยวกับสนามด้วยกล้องจุลทรรศน์จากการสังเกตด้วยกล้องสองตาธรรมดาแบบดั้งเดิมเป็นการทำซ้ำบนจอแสดงผล ซึ่งจะช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพการทำงาน
