ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับการเลือกระหว่างกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวและกล้องจุลทรรศน์แบบเรืองแสง
กล้องจุลทรรศน์เป็นเครื่องมือสำคัญในการเพาะเลี้ยงเซลล์และการทดลองอนุพันธ์ที่เกี่ยวข้อง ปัจจุบันมีกล้องจุลทรรศน์หลายประเภทในท้องตลาด และการเลือกกล้องจุลทรรศน์ที่ตรงตามความต้องการและเหมาะสมถือเป็นความท้าทาย ด้านล่างนี้ เราจะแนะนำหลักการของกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวและกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เพื่อให้เลือกได้ง่าย
องค์ประกอบของกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวจะเหมือนกับกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป โดยส่วนใหญ่ประกอบด้วยสามส่วน ได้แก่ ส่วนเชิงกล ส่วนส่องสว่าง และส่วนเกี่ยวกับแสง องค์ประกอบของกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวจะเหมือนกับกล้องจุลทรรศน์ตั้งตรงทั่วไป ยกเว้นว่าเลนส์ใกล้วัตถุและระบบส่องสว่างจะกลับด้าน โดยอันแรกอยู่ต่ำกว่าเวทีและอันหลังอยู่เหนือเวที โครงสร้างนี้ช่วยเพิ่มระยะห่างที่มีประสิทธิภาพระหว่างระบบโฟกัสแบบส่องสว่างและเวทีได้มากขึ้น ทำให้วางเครื่องมือสังเกตการณ์ที่หนาขึ้น เช่น จานเพาะเลี้ยงและขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ได้ง่ายขึ้น (แน่นอนว่า สามารถใช้กระจกสไลด์ได้เช่นกัน) ในขณะที่ระยะห่างในการทำงานระหว่างเลนส์ใกล้วัตถุและวัสดุไม่จำเป็นต้องใหญ่มาก สถาบันการแพทย์และสุขภาพ มหาวิทยาลัย และสถาบันวิจัยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวเพื่อสังเกตจุลินทรีย์ เซลล์ แบคทีเรีย การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ สารแขวนลอย ตะกอน ฯลฯ สามารถสังเกตกระบวนการสืบพันธุ์ของเซลล์และแบคทีเรียและการแบ่งตัวในอาหารเลี้ยงเชื้อได้อย่างต่อเนื่อง และสามารถจับสถานะใดๆ ในระหว่างกระบวนการนี้ ใช้กันอย่างแพร่หลายในสาขาต่างๆ เช่น เซลล์วิทยา ปรสิตวิทยา มะเร็งวิทยา ภูมิคุ้มกันวิทยา พันธุวิศวกรรม จุลชีววิทยาอุตสาหกรรม พฤกษศาสตร์ ฯลฯ
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้เพื่อศึกษาการดูดซึม การเคลื่อนย้าย การกระจาย และตำแหน่งของสารภายในเซลล์ สำหรับวัตถุที่ทดสอบ มีสองวิธีในการสร้างแสงเรืองแสง: การเรืองแสงที่เกิดขึ้นเองซึ่งจะปล่อยแสงเรืองแสงโดยตรงหลังจากการฉายรังสี UV; การเรืองแสงทุติยภูมิเกิดขึ้นเมื่อวัตถุที่สังเกตได้รับการบำบัดด้วยสีย้อมฟลูออเรสเซนต์ จากนั้นฉายรังสีอัลตราไวโอเลตเพื่อเปล่งแสงเรืองแสง สารบางชนิดในเซลล์ เช่น คลอโรฟิลล์ ทำให้เกิดการเรืองแสงได้เองเมื่อสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต สารบางชนิดไม่สามารถเปล่งแสงเรืองแสงได้ แต่หากเปื้อนด้วยสีย้อมเรืองแสงหรือแอนติบอดี้เรืองแสง สารเหล่านั้นก็สามารถเปล่งแสงเรืองแสงทุติยภูมิได้หลังจากถูกฉายรังสีด้วยแสงอัลตราไวโอเลต กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้แหล่งกำเนิดแสงจุดที่มีประสิทธิภาพสูงในการเปล่งแสงความยาวคลื่นจำนวนหนึ่ง (แสงอัลตราไวโอเลต 365 นาโนเมตรหรือแสงสีม่วงสีฟ้า 420 นาโนเมตร) ผ่านระบบกรองสีเป็นแสงกระตุ้น ซึ่งจะกระตุ้นสารเรืองแสงภายในชิ้นงานให้ปล่อยแสงเรืองแสงสีต่างๆ จากนั้นสังเกตผ่านการขยายของเลนส์ใกล้วัตถุและช่องมองภาพ ด้วยวิธีนี้ แม้ว่าแสงฟลูออเรสเซนต์จะอ่อนในพื้นหลังที่เข้ม แต่ก็สามารถจดจำได้ง่ายและมีความไวสูง ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการศึกษาโครงสร้างเซลล์ หน้าที่ และองค์ประกอบทางเคมี
