ข้อกำหนดความหนาของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงสำหรับสไลด์แก้ว
การคายน้ำด้วยกล้องจุลทรรศน์และการติดตัวอย่าง: เนื่องจากการหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ เซลล์จะสูญหาย ดังนั้นจึงเป็นการดีที่สุดที่จะติดเซลล์กับพื้นผิวของสไลด์แก้วหรือแผ่นพลาสติกสำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง เพื่อให้เซลล์ถูกทำให้แห้งและทำให้แห้งพร้อมกับแก้ว สไลด์หรือแผ่นพลาสติก ข้อกำหนดสำหรับความหนาของกระจกสไลด์ในกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง เพื่อให้เซลล์ติดกับกระจกสไลด์หรือแผ่นพลาสติกได้ จำเป็นต้องวางชั้นฟิล์มบนกระจกสไลด์หรือแผ่นพลาสติกก่อน วิธีการวางฟิล์มมีดังนี้:
(1) วิธีที่ง่ายที่สุดสำหรับการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงคือการวางฟิล์มโพลีไวนิลฟอร์มาล (formvar) เป็นชั้นบาง ๆ แช่สไลด์ที่ทำความสะอาดแล้วในสารละลายคลอโรฟอร์มโพลิไวนิลฟอร์มาล (0.5-1) เปอร์เซ็นต์ หลังจากที่บรรยากาศระเหย ฟิล์มสีขาวจะปรากฏขึ้นบนสไลด์ เขย่าสไลด์หลาย ๆ ครั้งในคลอโรฟอร์มเพื่อให้ฟิล์มเปลี่ยน บางและพร้อมใช้งาน
(2) หยด 0.1 ละติจูด โพลี-แอล-ไลซีน (ละลายโพลี-ไลซีน 1 มก. ในน้ำกรอง 1 มล. ระหว่างการเตรียม) บนสไลด์แก้วที่สะอาด แล้วใส่ในกล่องจ่าย 450C หลังจากที่หยดคลี่ออก . แห้ง. วิธีนี้ดีที่สุดเนื่องจากโพลี-แอล-ไลซีนมีประจุบวก ทำให้สามารถติดเซลล์ที่มีประจุลบบนพื้นผิวได้มากขึ้น
(3) เติมพลาสมาและกลีเซอรอลลงในน้ำกลั่นในอัตราส่วน (30--40) เปอร์เซ็นต์ และ (3-5) เปอร์เซ็นต์ ตามข้อกำหนดของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงสำหรับความหนาของสไลด์เพื่อสร้างโปรตีนกลีเซอรอล สารละลาย. ของเหลวจะหยดลงบนสไลด์แก้วที่สะอาดแล้ว คลี่ออกและทำให้แห้งภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ฟิล์มโปรตีนที่วางแช่อยู่ในกลูตาราลดีไฮด์ 2 เปอร์เซ็นต์เพื่อตรึงโปรตีน ล้างและทำให้แห้งเพื่อใช้ในภายหลัง ก่อนใช้งาน พลาสมาจะหยดลงบนฟิล์มโปรตีน ทำให้ "เปิดใช้งาน" แล้วล้างออกด้วยบัฟเฟอร์หลังจากผ่านไป 30 นาที และนำไปใช้ได้โดยตรง
เซลล์คงที่และสะอาดถูกทำให้เป็นเซลล์แขวนตะกอนที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมด้วยน้ำกรองภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบดิจิทัล และกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงจะถูกวางบนสไลด์แก้วหรือแผ่นพลาสติกที่ปิดด้วยเมมเบรน และวางไว้ในที่ชื้นต่ำ อุณหภูมิ (40C) สภาพแวดล้อม ( 30-120) นาที เพื่อให้เซลล์ยึดติดกับเมมเบรน ใช้แหนบจับแผ่นกระจกแล้วเขย่าในน้ำกลั่น 2 ชั้นที่สะอาด แล้วล้างเซลล์ที่ไม่ติดออกด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ข้อกำหนดสำหรับความหนาของแผ่นสไลด์ในกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง กล้องจุลทรรศน์แบบโพลาไรซ์จะถูกวางอย่างรวดเร็วในภาชนะที่บรรจุด้วยอะซิโตน 50 เปอร์เซ็นต์ (หรือเอทานอล) กระบวนการขจัดน้ำคือการใส่สไลด์ลงในอะซีโตนหรือเอทานอลที่มีความเข้มข้นเพิ่มขึ้นทุกๆ 3 นาที และกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงหรือเพิ่มความเข้มข้นของสารขจัดน้ำอย่างต่อเนื่องในภาชนะสไลด์แก้ว จากประสบการณ์ในห้องปฏิบัติการของผู้เขียน การดำเนินการหลังสะดวกกว่า วิธีการเฉพาะของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงสามารถดูดสารขจัดน้ำออกครึ่งหนึ่งในภาชนะทุกๆ 3 นาที จากนั้นเติมสารขจัดน้ำในปริมาณที่เท่ากันที่มีความเข้มข้น 100 เปอร์เซ็นต์ หลังจากการดำเนินการ 5-6 ความเข้มข้นของสารขจัดน้ำในหลอดราคาของกล้องจุลทรรศน์จะสูงกว่า 0.5 เปอร์เซ็นต์ และเซลล์จะถูกทำให้แห้งได้สำเร็จ หลังจากการอบแห้งที่จุดวิกฤต สไลด์แก้วหรือแผ่นพลาสติกจะถูกติดกาวเข้ากับแท่นวางตัวอย่างด้วยกาวนำไฟฟ้าสำหรับการเคลือบโลหะ นอกจากนี้ยังมีความสะดวกในการติดเซลล์กับเยื่อหุ้มเซลล์ที่วางไว้ด้วยวิธีที่สาม กล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัลสามารถแขวนเซลล์ที่ตรึงไว้โดยความเข้มข้นต่ำของกลูตาราลดีไฮด์บนฟิล์มโปรตีน "กระตุ้น" กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงกำหนดให้วางสไลด์แก้วที่มีความหนาเป็นเวลา 10 นาที และแช่สไลด์แก้วหรือแผ่นพลาสติกในกลูตาราลดีไฮด์ 2 เปอร์เซ็นต์ หลังจากผ่านไป 30 นาที ให้ล้างออกด้วยน้ำกลั่นสองชั้นที่กรองแล้ว ไล่น้ำออก เช็ดให้แห้ง และเคลือบโลหะตามวิธีการข้างต้น
