การเตรียมและการสังเกตตัวอย่างทางชีวภาพสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ขึ้นอยู่กับความยาวคลื่นของแสงที่ใช้ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนซึ่งถือกำเนิดขึ้นในปี พ.ศ. 2476 มีความละเอียดสูงกว่ากล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงอย่างมาก เนื่องจากการใช้ลำอิเล็กตรอนที่มีความยาวคลื่นสั้นกว่าแสงที่มองเห็นเป็นแหล่งกำเนิดแสงมาก แหล่งกำเนิดแสงที่แตกต่างกันยังกำหนดชุดของความแตกต่างระหว่างกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนและกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
จากความแตกต่างในหลักการของการถ่ายภาพลำแสงอิเล็กตรอนและวิธีการกระทำต่อตัวอย่าง กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสมัยใหม่ได้พัฒนาเป็นหลายประเภท ปัจจุบันที่นิยมใช้กันมากที่สุดคือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด แบบแรกมีกำลังขยายรวมที่สามารถเปลี่ยนแปลงได้ระหว่าง 1,000-10000000 เท่า ในขณะที่แบบหลังมีกำลังขยายรวมที่สามารถเปลี่ยนแปลงได้ระหว่าง 20-300000 เท่า การทดลองนี้แนะนำการเตรียมตัวอย่างกล้องจุลทรรศน์สองประเภทเป็นหลัก ได้แก่ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด
2 อุปกรณ์
1. เชื้อ Escherichia coli มีความโน้มเอียง
2. สารละลายหรือรีเอเจนต์: เพนทิลอะซิเตต, กรดซัลฟิวริกเข้มข้น, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำหมัน, สารละลายโซเดียมฟอสโฟตุงสเตต 2% (pH 6.5-8.0), สารละลายโพลีไวนิลฟอร์มาลดีไฮด์ 0.3% (ละลายในคลอโรฟอร์ม), ไซโตโครม c, แอมโมเนียมอะซิเตต, พลาสมิด pBR322
3. เครื่องมือหรือเครื่องมืออื่นๆ ได้แก่ กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดา ตาข่ายทองแดง กรวยพอร์ซเลน บีกเกอร์ จานเพาะเชื้อ หยดหมัน แหนบปลอดเชื้อ หมุด สไลด์แก้ว จานนับ เครื่องเคลือบสุญญากาศ เครื่องอบแห้งจุดวิกฤต ฯลฯ
3 ขั้นตอนการดำเนินงาน
(1) การเตรียมและการสังเกตตัวอย่างด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน
1. การรักษาตาข่ายโลหะ
วางตัวอย่างกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงไว้บนสไลด์แก้วเพื่อการสังเกต อย่างไรก็ตาม ในกระจกเงาส่งผ่าน เนื่องจากอิเล็กตรอนไม่สามารถเจาะแผ่นกระจกได้ วัสดุตาข่ายจึงสามารถใช้เป็นพาหะเท่านั้น โดยทั่วไปเรียกว่าตาข่ายพาหะ ตาข่ายพาหะสามารถแบ่งได้เป็นข้อกำหนดต่างๆ เนื่องจากวัสดุและรูปร่างที่แตกต่างกัน โดยที่ตาข่ายทองแดงที่มีตาข่าย 200-400 ตาข่าย (จำนวนรู) มักใช้กันทั่วไป ควรทำความสะอาดตาข่ายทองแดงก่อนใช้งานเพื่อขจัดสิ่งสกปรกและรักษาความสะอาด มิฉะนั้นจะส่งผลต่อคุณภาพของฟิล์มรองรับและความชัดเจนของภาพถ่ายชิ้นงานทดสอบ ตาข่ายทองแดง 400 mesh ที่ใช้ในการทดลองนี้สามารถบำบัดได้โดยวิธีการต่อไปนี้ ขั้นแรก แช่และลอยด้วยเพนทิลอะซิเตตเป็นเวลาสองสามชั่วโมง จากนั้นล้างออกด้วยน้ำกลั่นหลายๆ ครั้ง และสุดท้ายจึงจุ่มและลอยตาข่ายทองแดงในเอทานอลแบบแอนไฮดรัสเพื่อให้เกิดภาวะขาดน้ำ หากตาข่ายทองแดงยังไม่สะอาดหลังจากวิธีการข้างต้น สามารถแช่ในกรดซัลฟิวริกเข้มข้นเจือจาง (1:1) เป็นเวลา 1-2 นาที หรือต้มในสารละลาย NaOH 1% สักครู่ แล้วล้างออกด้วยน้ำกลั่นหลายครั้ง จากนั้นทำให้แห้งในเอธานอลแบบไม่มีน้ำเพื่อใช้ในภายหลัง
