ข้อกำหนดสำหรับการเตรียมตัวอย่างประจำสำหรับกล้องจุลทรรศน์

ข้อกำหนดสำหรับการเตรียมตัวอย่างประจำสำหรับกล้องจุลทรรศน์

กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลเป็นผลิตภัณฑ์ใหม่ที่ใช้เทคโนโลยีขั้นสูงซึ่งพัฒนาขึ้นในทศวรรษที่ 1980 และเป็นหนึ่งในเครื่องมือวิเคราะห์ที่สำคัญในอณูชีววิทยาและวิทยาศาสตร์ชีวภาพในปัจจุบัน กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลอาศัยการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงโดยเพิ่มอุปกรณ์สแกนด้วยเลเซอร์ โดยใช้คอมพิวเตอร์ในการประมวลผลภาพเพื่อให้ได้ภาพเรืองแสงของโครงสร้างจุลภาคภายในเซลล์หรือเนื้อเยื่อ และเพื่อสังเกตการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของเครื่องส่งสัญญาณทางสรีรวิทยาจำนวนมากในระดับเซลล์ย่อย กลายเป็นเครื่องมือวิจัยที่ทรงพลังในด้านสัณฐานวิทยา ชีววิทยาของเซลล์ระดับโมเลกุล ประสาทวิทยาศาสตร์ เภสัชวิทยา พันธุศาสตร์ และสาขาวิทยาศาสตร์อื่นๆ

การเตรียมตัวอย่างสำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลเป็นขั้นตอนที่สำคัญก่อนการตรวจหา ตัวอย่างต้องติดฉลากด้วยหลอดฟลูออเรสเซนต์ (เดี่ยว สอง สาม)

เดอะ
ตัวอย่างสามารถเป็นเนื้อเยื่อคงที่หรือเนื้อเยื่อที่มีชีวิต หรือเนื้อเยื่อคงที่หรือเนื้อเยื่อที่มีชีวิต ควรเพาะเลี้ยงเซลล์บนจานเพาะเลี้ยงขนาดเล็กพิเศษหรือแผ่นปิดของ Confocal แขวนเซลล์ เขย่าหรือวางเป็นชิ้น ๆ และปิดด้วยแผ่นฟิล์มปิดฝา ความหนาของ Zda ของตัวอย่างอยู่ที่ประมาณ 1~2 มม. ความหนาของกระจกครอบที่ใช้ควรน้อยกว่า 0.17 มม. และความหนาของกระจกสไลด์ควรอยู่ระหว่าง 0.8~1.2 มม. และพื้นผิวเรียบ ความหนาสม่ำเสมอ และไม่มีแสงรบกวนที่เห็นได้ชัด สื่อการติดตั้งมักใช้สำหรับตัวอย่างคงที่ และกลีเซอรอลที่เตรียมใน PBS ที่มีค่า pH เท่ากับ 85-9 มักใช้สำหรับการติด

ข้อกำหนดในการเตรียมตัวอย่างเป็นประจำ:

1. การเลือกสีย้อม

เนื่องจากกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลใช้เลเซอร์ความยาวคลื่นเดียวเป็นแหล่งกำเนิดแสง การเลือกสีย้อมเรืองแสงจึงควรขึ้นอยู่กับความยาวคลื่นของเลเซอร์ที่ติดตั้งกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอล หากมีสีย้อมเรืองแสงหลายตัวในตัวอย่างเดียวกัน ควรพิจารณาความยาวคลื่นที่เปล่งออกมาให้มากที่สุดด้วย อย่าทับกันเพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาการข้ามสี

2. การเลือกผู้ให้บริการตัวอย่าง

โดยทั่วไป เลนส์ใกล้วัตถุกำลังสูงของกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลคือเลนส์น้ำมัน รูรับแสงตัวเลขมีขนาดเล็ก และระยะการทำงานระหว่างเลนส์กับตัวอย่างจะต้องไม่เกิน 0.17 มม. สไลด์และใบปิดไม่เป็นไร หากเป็นเซลล์แขวนลอยหรืออนุภาคแขวนลอย สามารถใช้จานเพาะเชื้อสำหรับกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลโดยเฉพาะเพื่อนำตัวอย่างไปสังเกตการณ์ได้

3. การเลือกสื่อการติดตั้ง

หากจำเป็นต้องสังเกตตัวอย่างเพียงครั้งเดียวและสารเรืองแสงไม่ดับง่าย คุณสามารถเลือกส่วนผสมของกลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นระดับหนึ่งเพื่อปิดผนึกสไลด์ได้ หากจำเป็นต้องวางตัวอย่างเป็นระยะเวลาหนึ่งและถ่ายหลายครั้ง ควรเลือกสื่อการติดตั้งป้องกันการดับฟลูออเรสเซนต์เพื่อลดการสูญเสียสัญญาณฟลูออเรสเซนต์