ข้อกำหนดสำหรับการผลิตตัวอย่างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์
(1) สไลด์แก้ว
ความหนาของสไลด์ควรอยู่ระหว่าง 0.8 ถึง 1.2 มม. หากสไลด์หนาเกินไป ในด้านหนึ่งจะดูดซับแสงได้มากขึ้น และในทางกลับกัน ก็ไม่สามารถทำให้เกิดแสงกระตุ้นการรวมตัวบนชิ้นงานทดสอบได้ สไลด์จะต้องเรียบ มีความหนาสม่ำเสมอ และปราศจากการเรืองแสงที่เกิดขึ้นเองอย่างเห็นได้ชัด บางครั้งจำเป็นต้องใช้สไลด์แก้วควอทซ์
(2) ฝาครอบกระจกสไลด์
ความหนาของกระจกครอบประมาณ 0.17 มม. ซึ่งเรียบและสะอาด เพื่อเพิ่มความตื่นเต้น สามารถใช้กระจกครอบสัญญาณรบกวนได้ นี่คือกระจกฝาครอบที่ออกแบบมาเป็นพิเศษซึ่งมีสารหลายชั้น (เช่น แมกนีเซียมฟลูออไรด์) ซึ่งมีผลกระทบต่อการรบกวนที่แตกต่างกันต่อความยาวคลื่นของแสงที่แตกต่างกัน ช่วยให้เรืองแสงผ่านไปได้อย่างราบรื่น ในขณะที่การกระตุ้นการสะท้อนสามารถกระตุ้นชิ้นงานได้
(3) ตัวอย่าง
ชิ้นเนื้อเยื่อหรือตัวอย่างอื่นๆ ไม่ควรหนาเกินไป เนื่องจากแสงกระตุ้นส่วนใหญ่จะถูกใช้ในส่วนล่างของชิ้นงานทดสอบ ในขณะที่ส่วนบนที่สังเกตได้โดยตรงจากเลนส์ใกล้วัตถุนั้นไม่ได้ตื่นเต้นเต็มที่ นอกจากนี้ การทับซ้อนกันของเซลล์หรือการมาสก์สิ่งเจือปนอาจส่งผลต่อการตัดสิน
(4) ตัวแทนการปิดผนึก
กลีเซอรีนมักใช้เป็นสารยึดติด และต้องปราศจากสารเรืองแสงที่เกิดขึ้นเอง ไม่มีสี และโปร่งใส ความสว่างของฟลูออเรสเซนต์จะสว่างกว่าที่ pH 8.5~9.5 และไม่จางง่ายอย่างรวดเร็ว ดังนั้น ส่วนผสมที่เท่ากันของกลีเซอรอลและบัฟเฟอร์คาร์บอเนต 0.5mol/l ที่ pH 9.0-9.5 โดยทั่วไปจะใช้เป็นสารปิดผนึก
(5) น้ำมันกระจก
เมื่อสังเกตตัวอย่างโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์สนามมืดและกล้องจุลทรรศน์น้ำมัน จำเป็นต้องใช้น้ำมันสำหรับเลนส์ วิธีที่ดีที่สุดคือใช้น้ำมันสำหรับเลนส์ที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ที่ผลิตขึ้นเป็นพิเศษ ซึ่งสามารถแทนที่ด้วยกลีเซอรอลตามที่กล่าวไว้ข้างต้นได้ สามารถใช้พาราฟินเหลวได้ แต่ดัชนีการหักเหของแสงต่ำและมีผลกระทบเล็กน้อยต่อคุณภาพของภาพ
ข้อควรระวังในการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์
(1) ปฏิบัติตามข้อกำหนดคู่มือโรงงานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์อย่างเคร่งครัดและอย่าเปลี่ยนโปรแกรมโดยพลการ
(2) การตรวจสอบควรดำเนินการในห้องมืด หลังจากเข้าไปในห้องมืด ให้เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟและจุดไฟปรอทความดันสูงพิเศษเป็นเวลา 5 ถึง 15 นาที หลังจากที่แหล่งกำเนิดแสงฉายแสงจ้าและคงที่แล้ว ดวงตาจะปรับให้เข้ากับห้องมืดได้อย่างเต็มที่ก่อนที่จะเริ่มสังเกตชิ้นงาน
(3) เพื่อป้องกันความเสียหายจากรังสียูวีต่อดวงตา ควรสวมแว่นตาป้องกันเมื่อปรับแหล่งกำเนิดแสง
(4) เวลาในการตรวจสอบควรเป็น 1-2 ชั่วโมงในแต่ละครั้ง หากเกิน 90 นาที ความเข้มของการส่องสว่างของหลอดปรอทความดันสูงพิเศษจะค่อยๆ ลดลง และการเรืองแสงจะอ่อนลง หลังจากสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลตเป็นเวลา 3-5 นาที การเรืองแสงของชิ้นงานก็ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเช่นกัน ดังนั้นจึงไม่ควรเกิน 2-3 ชั่วโมงเป็นอย่างสูงสุด
(5) อายุการใช้งานของแหล่งกำเนิดแสงของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์มีจำกัด และควรตรวจสอบชิ้นงานจากส่วนกลางเพื่อประหยัดเวลาและปกป้องแหล่งกำเนิดแสง เมื่ออากาศร้อนควรเพิ่มพัดลมไฟฟ้าเพื่อกระจายความร้อนและความเย็น เมื่อเปลี่ยนหลอดไฟใหม่ควรบันทึกระยะเวลาการใช้งานไว้ตั้งแต่ต้น เมื่อปิดหลอดไฟแล้วต้องการใช้อีกครั้งจะต้องรอให้หลอดไฟเย็นสนิทก่อนจึงจะติดไฟได้ หลีกเลี่ยงการจุดไฟแหล่งกำเนิดแสงหลายครั้ง
(6) สังเกตตัวอย่างทันทีหลังจากการย้อมสี เนื่องจากแสงเรืองแสงจะค่อยๆ ลดลงเมื่อเวลาผ่านไป หากเก็บชิ้นงานทดสอบไว้ในถุงพลาสติกโพลีเอทิลีนที่อุณหภูมิ 4 องศา อาจทำให้เวลาการลดทอนของฟลูออเรสเซนซ์ช้าลงและป้องกันการระเหยของสารยึดติด
(7) มาตรฐานการตัดสินสำหรับความสว่างของฟลูออเรสเซนต์โดยทั่วไปจะแบ่งออกเป็นสี่ระดับ ได้แก่ "หนึ่ง" - ไม่มีหรือเรืองแสงอ่อนที่มองเห็นได้ บวก - มองเห็นได้เฉพาะแสงเรืองแสงที่มองเห็นได้ชัดเจนเท่านั้น plus plus - มองเห็นได้ด้วยแสงเรืองแสงที่สดใส ' plus plus plus ' - แสงเรืองแสงที่มองเห็นได้และพราว
