การใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านที่ถูกต้อง
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกลับหัวเป็นกล้องจุลทรรศน์อเนกประสงค์ที่ใช้ในสาขาการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ชีวภาพระดับสูง โครงสร้างมันซับซ้อนและมีราคาแพง ดังนั้น เพื่อให้นักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษาทางการแพทย์เชี่ยวชาญการใช้งานและมาตรฐานการใช้งานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านได้อย่างถูกต้อง ครูจำเป็นต้องสอนความรู้พื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านก่อนจึงจะสาธิตการทำงานจริงของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้าน ควรแนะนำโครงสร้าง หลักการ ฟังก์ชัน และวิธีการใช้งานพื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้าน จากนั้นสาธิตการทำงานที่แตกต่างกันสำหรับชิ้นงานทดสอบที่แตกต่างกันในการใช้งานเฉพาะด้าน โดยค่อยๆ ดำเนินการและใช้งานกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านให้เป็นมาตรฐานสำหรับนักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษาทางการแพทย์
1. การใช้การสังเกตด้วยสายตาอย่างถูกต้อง หน้าที่หนึ่งของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านคือการสังเกตในขอบเขตการมองเห็นที่สว่าง หลักการพื้นฐานคือเพื่อให้ได้ภาพในพื้นหลังที่สว่างโดยพิจารณาจากการดูดกลืนแสงที่แตกต่างกันของแต่ละส่วนของชิ้นงานทดสอบหลังจากถูกส่องสว่างด้วยแสง เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกตเซลล์ที่เปื้อนหรือมีสี ชิ้นเนื้อเยื่อ และตัวอย่างอื่นๆ
2. การใช้การสังเกตผลต่างอย่างถูกต้อง ฟังก์ชั่นที่สองของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับหัวคือการสังเกตความแตกต่างของเฟส หลักการพื้นฐานของมันคือการแปลงความแตกต่างของเส้นทางแสงของส่วนต่างๆ ของตัวอย่างให้เป็นความแตกต่างของแอมพลิจูด และสังเกตผ่านวัตถุประสงค์ของความแตกต่างของเฟสด้วยแผ่นเฟสและสปอตไลท์ที่มีรูรับแสงทรงกลม เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกตเซลล์ที่มีชีวิตหรือชิ้นเนื้อเยื่อที่ไม่มีรอยเปื้อน ในกระบวนการสอนเชิงทดลอง นอกเหนือจากการชี้แนะนักศึกษาแพทย์ให้ปฏิบัติตามวิธีการปฏิบัติงานพื้นฐานของการสังเกตความแตกต่างของเฟสอย่างถูกต้องแล้ว สิ่งสำคัญยิ่งกว่าคือต้องแนะนำให้พวกเขาเข้าใจและเชี่ยวชาญตัวอย่างโดยใช้การสังเกตความแตกต่างของเฟส สำหรับพวกเขา วิธีการที่ใช้กันมากที่สุดในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ในอนาคตคือการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ของเซลล์เพาะเลี้ยง ประการแรก สำหรับการเลือกอุปกรณ์เซลล์ โดยทั่วไปแนะนำให้ใช้จานเพาะเลี้ยง จาน และขวดที่ทำจากวัสดุแก้วและพลาสติก ส่วนใหญ่ไม่มีสีและโปร่งใส และสามารถสังเกตได้โดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับหัว โดยไม่ต้องเทของเหลวในเซลล์ออกหรือผ่านการบำบัดอื่นๆ ประการที่สอง ในระหว่างการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ อย่าเปิดฝาอุปกรณ์โดยไม่ตั้งใจเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนในเซลล์ สุดท้ายนี้ สำหรับผู้ปฏิบัติงาน ควรสวมถุงมือ หน้ากาก และเสื้อคลุมสีขาวเพื่อไม่เพียงแต่ปกป้องสุขภาพของตนเองเท่านั้น แต่ยังป้องกันการปนเปื้อนในเซลล์ด้วย
3. การใช้การสังเกตเรืองแสงอย่างถูกต้อง ฟังก์ชั่นที่สามของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกลับหัวคือการสังเกตเรืองแสง หลักการพื้นฐานของมันคือการใช้แสงกระตุ้นเพื่อกระตุ้นตัวอย่างเพื่อสร้างสารเรืองแสง ซึ่งจะทำให้ได้รูปร่างและตำแหน่งของตัวอย่าง เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกตตัวอย่างที่ติดฉลากเรืองแสง การสังเกตเรืองแสงเป็นหน้าที่สำคัญของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับหัว พร้อมด้วยอุปกรณ์เสริมราคาแพงและการใช้งานพิเศษ เพื่อให้นักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษาทางการแพทย์เชี่ยวชาญบรรทัดฐานการปฏิบัติงานของการสังเกตเรืองแสงได้อย่างถูกต้อง ครูไม่เพียงแต่สอนวิธีการผ่าตัดขั้นพื้นฐานเท่านั้น แต่ที่สำคัญกว่านั้นคือ สอนให้พวกเขาทราบถึงความเป็นเอกลักษณ์ของมันด้วย ประการแรก ในการเตรียมชิ้นงาน พื้นผิวของสไลด์และกระจกครอบควรเรียบและมีความหนาเหมาะสม (สไลด์ควรอยู่ระหว่าง 0.8 มม. ถึง 1.2 มม. และกระจกครอบควรอยู่ที่ประมาณ {{5 }}.17 มม.); ชิ้นงานทดสอบควรมีความหนาที่เหมาะสมโดยหลีกเลี่ยงการทับซ้อนของเซลล์หรือการปิดบังสิ่งเจือปน สารปิดผนึกควรใช้ส่วนผสมที่เท่ากันของกลีเซอรอลและบัฟเฟอร์คาร์บอเนต (0.5mol/L pH 9.0-9.5) ประการที่สอง ก่อนที่จะสังเกตการเรืองแสง ควรปิดไฟในห้องและแสงสีขาวของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านเพื่อให้แน่ใจว่าจะอยู่ในสภาพแวดล้อมของห้องมืด สุดท้าย ในการสังเกตเรืองแสง เวลาในการสังเกตควรได้รับการควบคุมอย่างเข้มงวด โดยทั่วไปคือ 1-2 ชั่วโมงต่อครั้ง มิฉะนั้น แสงเรืองแสงจะสลายตัวและหายไป เมื่อปรับแหล่งกำเนิดแสง ควรสวมแว่นตาป้องกันเพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหายจากรังสียูวีต่อแว่นตา
4. การใช้การจับภาพที่ถูกต้อง ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ ไม่เพียงแต่กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านจะสามารถสังเกตการณ์ได้หลายครั้งเท่านั้น แต่กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับด้านยังสามารถจับภาพได้อีกด้วย ระบบกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกลับหัวจะรวมกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเข้ากับคอมพิวเตอร์ผ่านการแปลงโฟโตอิเล็กทริก ซึ่งไม่เพียงแต่ช่วยให้สามารถสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์บนช่องมองภาพเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการสังเกต แก้ไข และจัดเก็บภาพไดนามิกแบบเรียลไทม์บนคอมพิวเตอร์อีกด้วย
