วิธีการเตรียมสไลด์ไมโครสโคป
1. วิธีการสเมียร์
วิธีการสเมียร์ริ่งเป็นวิธีการเตรียมสไลด์โดยการเคลือบวัสดุลงบนสไลด์อย่างสม่ำเสมอ
วัสดุสเมียร์ได้แก่สิ่งมีชีวิตเซลล์เดียว- สาหร่ายขนาดเล็ก เลือด อาหารเลี้ยงเชื้อแบคทีเรีย เนื้อเยื่อหลวมของสัตว์และพืช อัณฑะ อับเรณู ฯลฯ
เมื่อทาควรให้ความสนใจกับ:
(1) ต้องทำความสะอาดกระจกสไลด์
(2) สไลด์กระจกควรแบน
(3) การเคลือบจะต้องสม่ำเสมอ หยดหยดลงบนกึ่งกลางขวาของกระจกสไลด์ แล้วเกลี่ยให้เท่าๆ กันด้วยใบมีดผ่าหรือไม้จิ้มฟัน
(4) การเคลือบควรมีความบาง ใช้สไลด์แก้วอีกอันเป็นสไลด์ ค่อยๆ ดันจากขวาไปซ้ายไปตามพื้นผิวของสไลด์แก้วด้วยของเหลวที่ทา (มุมระหว่างสไลด์ทั้งสองควรเป็น 30 องศาถึง 45 องศา ) แล้วทาเป็นชั้นบางๆ ที่สม่ำเสมอ
(5) แก้ไขแล้ว หากจำเป็นต้องทำการตรึง สามารถใช้การตรึงทางเคมีหรือวิธีการทำให้แห้ง (แบคทีเรีย) สำหรับการตรึงได้
(6) การย้อมสี แบคทีเรียใช้เมทิลีนบลู และเลือดใช้สารละลายการย้อมสีไรท์ น้ำยาย้อมสีควรครอบคลุมพื้นผิวเคลือบทั้งหมด
(7) ล้างออก ใช้กระดาษดูดซับเพื่อดูดซับหรือแห้ง
(8) ปิดผนึกฟิล์ม การอนุรักษ์ระยะยาวโดยใช้ฟิล์มต้นไม้แคนาดา
2. วิธีการกดแท็บเล็ต
วิธีการบีบอัดเป็นวิธีการหั่นวัสดุชีวภาพโดยวางไว้ระหว่างสไลด์แก้วและฝาปิด โดยใช้แรงกดเพื่อกระจายเซลล์เนื้อเยื่อ
กระบวนการทั่วไปของวิธีการกดแท็บเล็ต:
(1) การเลือกใช้วัสดุ ในการสังเกตการแบ่งเซลล์ ควรเลือกเซลล์เนื้อเยื่อสดที่มีการแบ่งเซลล์แข็งแรงเป็นวัสดุ เช่น ปลายราก เนื้อเยื่อปลายก้าน เซลล์ไขกระดูก อับเรณู (เซลล์แม่เรณู) รังอสุจิ (เซลล์อสุจิ) เป็นต้น
(2) แก้ไขแล้ว การตรึงวัสดุสามารถกำหนดได้ตามความต้องการ และควรบีบอัดตัวอย่างและสังเกตทันที ไม่จำเป็นต้องทำการตรึงแบบแยกกัน (ซิงโครนัสกับการย้อมสี) หากวัสดุไม่ได้รับการตรวจสอบทันทีหลังจากการสุ่มตัวอย่าง สามารถแก้ไขวัสดุนั้นได้โดยใช้สารช่วยตรึง (โดยทั่วไปคือสารตรึงแอลกอฮอล์ของกรดอะซิติก) หลังจากซ่อมเป็นเวลา 2-24 ชั่วโมง (ขึ้นอยู่กับวัสดุ) ให้ล้างด้วยเอทานอล 95% และเก็บในเอทานอล 70% เพื่อใช้ในภายหลัง
(3) การแยกจากกัน วัสดุที่เซลล์ไม่สามารถกระจายตัวได้ง่ายควรได้รับการบำบัดด้วยสารละลายแยกไฮโดรไลซิส (เช่น 1N HCl หรือน้ำอสุจิของกรดไฮโดรคลอริก) เป็นเวลา 6-20 นาที หลังจากแยกตัวออกแล้ว ควรล้างด้วยน้ำก่อนย้อมสี
(4) การย้อมสี สีย้อมมีหลายประเภท โดยทั่วไปโครโมโซมจะถูกย้อมด้วยสารละลายย้อมสีกรดอะซิติกสีม่วงแดง
(5) กดแท็บเล็ต วางวัสดุบนสไลด์แก้ว หยดน้ำหรือสารละลายสีย้อมหนึ่งหยด ปิดฝาสไลด์ แล้วใช้นิ้วหัวแม่มือกดเบาๆ
(6) สังเกต หลังจากการบีบอัดแล้วสามารถสังเกตได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์
