วิธีการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่ใช้กันทั่วไปสองวิธี
1 การสังเกตสนามมืด
จริงๆ แล้วขอบเขตการมองเห็นที่มืดคือการส่องสว่างของสนามมืด ลักษณะของมันแตกต่างจากขอบเขตการมองเห็นที่สว่าง เนื่องจากไม่ได้สังเกตแสงที่ส่องสว่างโดยตรง แต่สังเกตแสงสะท้อนหรือเลี้ยวเบนของวัตถุที่กำลังตรวจสอบ ดังนั้นขอบเขตการมองเห็นจึงกลายเป็นพื้นหลังสีเข้ม ในขณะที่วัตถุที่ถูกตรวจสอบนำเสนอภาพที่สว่างสดใส
หลักการของสนามมืดนั้นขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์ออพติคอลทินดอลล์ ซึ่งดวงตามนุษย์ไม่สามารถสังเกตอนุภาคฝุ่นได้เมื่อสัมผัสกับแสงจ้าเนื่องจากการเลี้ยวเบนที่เกิดจากแสงจ้า ถ้าแสงฉายไปในทางเฉียง อนุภาคดังกล่าวจะมีปริมาตรเพิ่มขึ้นเนื่องจากการสะท้อนของแสง ทำให้มองเห็นได้ด้วยตามนุษย์
อุปกรณ์พิเศษที่จำเป็นสำหรับการสังเกตสนามมืดคือสปอตไลต์สนามมืด คุณลักษณะของมันคือไม่อนุญาตให้ลำแสงผ่านวัตถุจากล่างขึ้นบน แต่เปลี่ยนเส้นทางของแสงให้เอียงไปทางวัตถุเพื่อให้แสงส่องสว่างไม่เข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุโดยตรง และใช้ภาพที่สว่างซึ่งเกิดจากการสะท้อนหรือการเลี้ยวเบนของแสงบนพื้นผิวของวัตถุที่ถูกตรวจสอบ ความละเอียดของการสังเกตสนามมืดนั้นสูงกว่าการสังเกตสนามสว่างมากถึง 0.02-0.004
2, วิธีการตรวจสอบกระจกคอนทราสต์เฟส
การประดิษฐ์กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์แบบเฟสที่ประสบความสำเร็จในการพัฒนากล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงถือเป็นความสำเร็จที่สำคัญในเทคโนโลยีกล้องจุลทรรศน์สมัยใหม่ เรารู้ว่าดวงตาของมนุษย์สามารถแยกแยะได้เฉพาะความยาวคลื่น (สี) และความกว้าง (ความสว่าง) ของคลื่นแสงเท่านั้น สำหรับตัวอย่างทางชีวภาพที่ไม่มีสีและโปร่งใส เมื่อแสงผ่าน ความยาวคลื่นและแอมพลิจูดจะไม่เปลี่ยนแปลงมากนัก ทำให้ยากต่อการสังเกตตัวอย่างในสนามที่สว่าง
กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสใช้ความแตกต่างในความยาวเส้นทางแสงของวัตถุที่กำลังตรวจสอบสำหรับการตรวจสอบกระจก โดยใช้ปรากฏการณ์การรบกวนของแสงอย่างมีประสิทธิภาพเพื่อเปลี่ยนความแตกต่างของเฟสที่สายตามนุษย์ไม่สามารถแยกแยะได้ให้กลายเป็นความแตกต่างของแอมพลิจูดที่สามารถแยกแยะได้ แม้แต่สารที่ไม่มีสีและโปร่งใสก็สามารถมองเห็นได้ชัดเจน ซึ่งอำนวยความสะดวกในการสังเกตเซลล์ของสิ่งมีชีวิตอย่างมาก ดังนั้น กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์แบบเฟสจึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัว
หลักการพื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์แบบเฟสคือการแปลงความแตกต่างของเส้นทางแสงของแสงที่มองเห็นที่ส่องผ่านชิ้นงานให้เป็นความแตกต่างของแอมพลิจูด ซึ่งจะช่วยปรับปรุงความแตกต่างระหว่างโครงสร้างต่างๆ และทำให้ชัดเจนและมองเห็นได้ หลังจากผ่านชิ้นงานแล้ว แสงจะผ่านการหักเห โดยเบี่ยงเบนไปจากเส้นทางแสงดั้งเดิมและล่าช้าไป 1/4 แลม (ความยาวคลื่น) หากความแตกต่างของเส้นทางแสงเพิ่มขึ้นหรือลดลงอีก 1/4 แลนซ์ ความแตกต่างของเส้นทางแสงจะกลายเป็น 1/2 แลม และการรบกวนระหว่างลำแสงทั้งสองจะเพิ่มขึ้นหรือลดลงหลังจากที่แกนรวมกัน ช่วยเพิ่มความคมชัด ในแง่ของโครงสร้าง กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสมีสองแบบ
ความแตกต่างพิเศษจากกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไป:
1. ไดอะแฟรมรูปวงแหวนตั้งอยู่ระหว่างแหล่งกำเนิดแสงและคอนเดนเซอร์ และหน้าที่ของมันคือการสร้างกรวยแสงกลวงที่ผ่านคอนเดนเซอร์และมุ่งเน้นไปที่ชิ้นงานทดสอบ
2. แผ่นเฟสเชิงมุม: แผ่นเฟสที่เคลือบด้วยแมกนีเซียมฟลูออไรด์จะถูกเพิ่มเข้าไปในเลนส์ใกล้วัตถุ ซึ่งสามารถหน่วงเฟสของแสงโดยตรงหรือแสงเลี้ยวเบนได้ 1/4 แลมบ์ สามารถแบ่งออกได้เป็น 2 ประเภท:
(1) . แผ่นเฟส A+: หน่วงเวลาแสงโดยตรง 1/4 แลมบ์ และเพิ่มคลื่นแสงสองชุดหลังจากรวมแกนเข้าด้วยกัน แอมพลิจูดเพิ่มขึ้น และโครงสร้างของชิ้นงานจะสว่างกว่าตัวกลางที่อยู่รอบๆ ทำให้เกิดคอนทราสต์ที่สดใส (หรือคอนทราสต์เชิงลบ)
(2) . เพลตเฟส B+: หน่วงเวลาแสงที่เลี้ยวเบน 1/4 γ และลบคลื่นแสงหลังจากรวมแกนของรังสีแสงสองชุดเข้าด้วยกัน ส่งผลให้แอมพลิจูดลดลงและสร้างคอนทราสต์สีเข้ม (หรือคอนทราสต์เชิงบวก) โครงสร้างจะเข้มกว่าตัวกลางที่อยู่โดยรอบ
