ข้อดีของกล้องจุลทรรศน์เลเซอร์คอนโฟคอลคืออะไร
เมื่อเปรียบเทียบกับกล้องจุลทรรศน์แบบไวด์ฟิลด์แบบเก่า เลเซอร์สแกนคอนโฟคอลไมโครสโคปมีลักษณะเฉพาะของความคมชัดสูง ความละเอียดสูง และความไวแสงสูง มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านชีวเวชศาสตร์และกลายเป็นเครื่องมือสร้างภาพที่สำคัญในสาขานี้ ทำไมคอนโฟคอลถึงได้รับความรักมากมายและมีข้อดีอย่างไร? บทความนี้แสดงรายการสามประเด็นเพื่อหารือเกี่ยวกับข้อดีของคอนโฟคอล
รวบรวมสัญญาณบนระนาบโฟกัสเท่านั้นทำให้ภาพไม่เบลอ
กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลบรรลุข้อได้เปรียบนี้ได้อย่างไร นี่เป็นเพราะฮาร์ดแวร์คอนโฟคอลที่สำคัญ—รูเข็ม ดังที่แสดงในรูปที่ 2 เป็นรูเล็กๆ ที่ด้านหน้าของเครื่องตรวจจับและวางบนระนาบออปติกที่เชื่อมกับระนาบโฟกัสของตัวอย่าง เมื่อแสงกระตุ้นฉายรังสีตัวอย่าง ทั้งระนาบโฟกัสและระนาบที่ไม่ใช่โฟกัสของพื้นที่ตัวอย่างจะถูกกระตุ้นเพื่อสร้างสัญญาณเรืองแสง ปรับขนาดรูเข็มที่เหมาะสม (ปกติคือ 1 Au) เพื่อให้สัญญาณเรืองแสงบนระนาบโฟกัส (เส้นประสีเขียว) อาจเป็นสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ (เส้นประสีแดงและสีน้ำเงิน) ที่ผ่านรูเข็มเพื่อไปยังตัวตรวจจับจากระนาบโฟกัส ไม่สามารถไปถึงตัวตรวจจับผ่านรูเข็มได้ ด้วยการเพิ่มรูเข็มของฮาร์ดแวร์ คอนโฟคอลจะได้ภาพที่ชัดเจนและมีคุณภาพสูงโดยไม่ต้องเปลี่ยนวิธีการสร้างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ธรรมดา
เนื่องจากการมีอยู่ของรูเข็ม เราจึงรับสัญญาณได้เฉพาะบนระนาบโฟกัสและได้ภาพสองมิติที่มีความละเอียดสูง การปรับตำแหน่งแกน Z อย่างต่อเนื่องทำให้สามารถรับภาพสองมิติที่ตำแหน่งแกน Z ที่แตกต่างกัน และสามารถรับภาพ "ชิ้นเลนส์" แบบต่อเนื่องได้ หลังจากได้รับชิ้นส่วนออปติคัลเหล่านี้แล้ว โมดูล 3 มิติที่ติดตั้งซอฟต์แวร์เครื่องมือจะสามารถใช้เพื่อสร้างภาพ 3 มิติใหม่เพื่อสร้างภาพ 3 มิติที่ชัดเจน คอลเลคชันภาพชิ้นส่วนออพติคอลแบบไม่ทำลายและต่อเนื่องนี้ช่วยให้การทำงานของ "เซลล์ CT" เป็นจริง
ความแม่นยำของผลลัพธ์การรวมโลคัลไลเซชันนั้นสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับความละเอียดของภาพ ดังนั้น เราจำเป็นต้องเลือกวิธีการสร้างภาพที่มีความละเอียดสูงกว่าเมื่อทำการทดลองการโคโลคัลไลเซชัน เมื่อเปรียบเทียบกับกล้องจุลทรรศน์แบบเก่า กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลได้กลายเป็นเครื่องมืออันทรงพลังสำหรับการวิจัยการรวมพื้นที่ เนื่องจากข้อดีของความละเอียดสูง
เนื่องจากการมีอยู่ของขีดจำกัดการเลี้ยวเบน ความละเอียดออปติคอลแบบคอนโฟคอลทั่วไปจึงอยู่ที่ประมาณ 200 นาโนเมตร เมื่อเราต้องการสังเกตโครงสร้างที่มีขนาดใหญ่กว่า 200 นาโนเมตร คอนโฟคอลสามารถกำหนดระดับของโคโลคัลไลเซชันได้อย่างแม่นยำ หากจำเป็นต้องมีการวิเคราะห์การระบุโลคัลไลเซชัน คุณสามารถเลือกโมดูลการวิเคราะห์โลคัลไลเซชันที่ติดตั้งในซอฟต์แวร์คอนโฟคอลได้
