ข้อกำหนดของตัวอย่างใดที่จำเป็นสำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

ข้อกำหนดของตัวอย่างใดที่จำเป็นสำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

ในกระบวนการเตรียมตัวอย่างของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ความหนาของชิ้นตัวอย่างอยู่ระหว่าง 2-25um; ความหนาของสไลซ์ของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนอยู่ภายใน 50-100นาโนเมตร (ยกเว้นสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแรงดันสูง ซึ่งมีความหนาของตัวอย่างได้ถึง 1um) ดังนั้นวิธีสไลซ์ที่ใช้จึงไม่เหมือนกันทั้งหมด

ในแง่ของพาหะ พาหะของส่วนกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงคือสไลด์แก้ว ในขณะที่พาหะของส่วนของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนคือกริด

ในแง่ของการตรึง ชิ้นส่วนของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงจะได้รับการแก้ไขด้วยสารตรึงแบบผสม ในขณะที่ชิ้นส่วนของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนจะได้รับการแก้ไขซ้ำๆ ด้วยการตรึงเพียงครั้งเดียว

ในแง่ของการย้อมสี การย้อมสีของตัวอย่างแสงนั้นค่อนข้างง่าย ตามตัวอย่างการสังเกตที่แตกต่างกันและประเภทของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง โดยปกติแล้วการย้อมด้วยสารย้อมสีคงที่บางชนิดก็เพียงพอแล้ว มีวิธีการมากมายและซับซ้อนในการย้อมสีตัวอย่างด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน เช่น การย้อมสีเชิงลบ การย้อมสีเงิน เป็นต้น

ในแง่ของการฝัง พาราฟิน คอลโลเดียน เจลาติน ฯลฯ ใช้เป็นตัวแทนการฝังสำหรับส่วนของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง อีพอกซีเรซิน โพลีสไตรีนเรซิน ไอโซบิวทิลีนเรซิน และเรซินที่ละลายน้ำได้ถูกนำมาใช้เป็นตัวช่วยในการฝังตัวสำหรับส่วนของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน

เพื่อให้แน่ใจว่าขอบเขตการมองเห็นของกล้องจุลทรรศน์สามารถส่องสว่างได้ทั่วถึงและทั่วถึง จะต้องปรับระบบแสงส่องสว่างเมื่อติดตั้งและแก้ไขข้อบกพร่องของกล้องจุลทรรศน์เป็นครั้งแรก นี่เป็นวิธีที่สำคัญและเป็นวิธีพื้นฐานที่สุดในการใช้กล้องจุลทรรศน์อย่างถูกต้องและได้ผลลัพธ์ที่ถูกต้องและเชื่อถือได้ ความต้องการ. นอกจากนี้ การควบคุมการปรับระบบทางเดินแสงของแสงอย่างถูกต้องเป็นขั้นตอนที่จำเป็นหลังจากเปลี่ยนหลอดไฟแหล่งกำเนิดแสงระหว่างการใช้กล้องจุลทรรศน์ และยังเป็นวิธีที่จำเป็นในการตรวจสอบประสิทธิภาพของกล้องจุลทรรศน์เป็นครั้งคราวในระหว่างวัน ใช้. การปรับระบบเส้นทางออปติคอลการส่องสว่างของกล้องจุลทรรศน์ส่วนใหญ่ประกอบด้วยสี่รายการต่อไปนี้: 1. การปรับเบื้องต้นของห้องหลอดไฟแหล่งกำเนิดแสงภายนอกกล้องจุลทรรศน์ ① เปิดเปลือกของห้องหลอดไฟก่อน กดคลิปสปริงเพื่อใส่หลอดฮาโลเจนเข้าไปใน ซ็อกเก็ตและหลีกเลี่ยงการสัมผัสโดยตรงกับหลอดไฟด้วยมือของคุณในระหว่างการติดตั้ง (สามารถแยกออกได้ด้วยผ้านุ่มหรือกระดาษ) เพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้มีรอยนิ้วมือและสิ่งสกปรกอื่น ๆ บนหลอดไฟซึ่งจะส่งผลต่ออายุการใช้งานของหลอดไฟ ②วางโคมไฟบนโต๊ะ หลังจากเปิดเครื่องแล้ว ใช้ไขควงพิเศษเพื่อปรับรูลูกบิดโฟกัสของโคมไฟ (ทำเครื่องหมายด้วย "←→") เพื่อให้เส้นใยฉายบนผนัง 1-2 เมตรออกไปและภาพเส้นใยจะถูกปรับ จากนั้นปรับความสูงของหลอดไฟและปรับรูด้าย (ที่มีเครื่องหมาย "──") เพื่อให้ตำแหน่งของไส้หลอดเหมาะสม จากนั้นปรับตำแหน่งซ้ายและขวาของหลอดไฟเพื่อปรับรูสกรู (ที่มีเครื่องหมาย "──") เพื่อให้ตำแหน่งซ้ายและขวาของไส้หลอดเหมาะสม

2. วัตถุประสงค์ของการตรวจสอบและแก้ไขตำแหน่งของแหล่งกำเนิดแสงส่องสว่าง (ฟิลาเมนต์) ในกล้องจุลทรรศน์คือการปรับปลายภาพของแสงให้ตรงกับระยะการมองเห็นของเลนส์ใกล้วัตถุ และเพื่อให้แน่ใจว่าขอบเขตการมองเห็นของ กล้องจุลทรรศน์จะส่องสว่างอย่างเต็มที่และสม่ำเสมอจากมุมมองของแหล่งกำเนิดแสง การจัดแสงซึ่งเป็นข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับการปรับระบบไฟส่องสว่างของ Kuhler เครื่องมือพื้นฐานที่จำเป็น: กล้องโทรทรรศน์ตั้งศูนย์จะติดตั้งเมื่อซื้อกล้องจุลทรรศน์ ① ถอดปลอกกระจกฝ้าออกจากตัวโคม แล้วใส่ตัวโคมกลับเข้าไปบนกล้องจุลทรรศน์ ② เลือกเลนส์ใกล้วัตถุ 10x เปิดโปรแกรมแหล่งกำเนิดแสงเพื่อค้นหาตัวอย่างและโฟกัสให้ชัดเจน จากนั้นใช้เลนส์ใกล้วัตถุ 40x เพื่อโฟกัสตัวอย่างให้ชัดเจน (เลนส์ใกล้วัตถุ 40x คุณจะเห็นภาพรวมของเส้นใย ); ③ เปิดไดอะแฟรมรูรับแสงและไดอะแฟรมฟิลด์ของคอนเดนเซอร์ให้สุด ④ ถอดปลั๊ก eyepieces ออก แทนที่ด้วยกล้องโทรทรรศน์ที่อยู่ตรงกลาง จับส่วนสีขาว ยืด eyepieces สีดำด้วยมืออีกข้าง คุณจะเห็นภาพเส้นใยในขอบเขตการมองเห็น ⑤ หากตำแหน่งของเส้นใยไม่เหมาะสม ให้ปรับรู "──" เพื่อปรับภาพเส้นใยในแนวนอน และปรับรู "──" เพื่อปรับภาพเส้นใยในแนวตั้งจนกว่าจะปรับภาพเส้นใย ไปจนถึงภาพวงกลมแสงที่เพิ่งเติมรูรับแสงของเลนส์ใกล้วัตถุ ⑥ หลังจากปรับแล้ว ให้ใส่ปลอกกระจกฝ้ากลับเข้าที่เดิม ถอดปลั๊กกล้องโทรทรรศน์ที่อยู่ตรงกลางออก และเปลี่ยนเลนส์ใกล้ตาสำหรับการปรับครั้งต่อไป การปรับช่องหลอดไฟแหล่งกำเนิดแสงที่กล่าวถึงข้างต้นภายนอกกล้องจุลทรรศน์และการตรวจสอบตำแหน่งของตัวแหล่งกำเนิดแสงภายในกล้องจุลทรรศน์จำเป็นต้องดำเนินการเมื่อติดตั้งและแก้ไขจุดบกพร่องของกล้องจุลทรรศน์เป็นครั้งแรกเท่านั้น และเมื่อเปลี่ยนหลอดไฟแล้ว และไม่สามารถปรับกล้องจุลทรรศน์แบบสุ่มเมื่อใช้กล้องจุลทรรศน์ ในกรณีที่เกิดความสับสนก็สามารถปรับกลับสู่สถานะเดิมตามขั้นตอนข้างต้น

3. การปรับระบบส่องสว่างของ Kohler ให้ถูกต้อง ภารกิจหลักอย่างหนึ่งของการปรับกล้องจุลทรรศน์ที่ถูกต้องคือการปรับระบบทางเดินแสงของแสง และกุญแจสำคัญคือการปรับระบบส่องสว่างของ Kohler สำหรับทุกคนที่ใช้กล้องจุลทรรศน์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งผู้ที่ทำโฟโตไมโครกราฟ พวกเขาควรมีความเข้าใจและเชี่ยวชาญในหลักการของระบบส่องสว่าง Kuhler และขั้นตอนการปรับเพื่อให้สามารถใช้งานฟังก์ชั่นของกล้องจุลทรรศน์และถ่ายภาพได้อย่างเต็มที่ ภาพที่ออกมาจะได้ผลลัพธ์ที่สม่ำเสมอและสมบูรณ์แบบยิ่งขึ้น หลักการของระบบไฟส่องสว่างของ Kohler นั้นเรียบง่าย: แสงที่ปล่อยออกมาจากจุดใดๆ บนไฟส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสงสามารถให้ความสว่างแก่ขอบเขตการมองเห็นของกล้องจุลทรรศน์ และแสงที่ปล่อยออกมาจากแต่ละจุดบนไฟส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสงจะถูกรวบรวมไว้ และในฟิลด์ จากมุมมองของกล้องจุลทรรศน์ จะได้การส่องสว่างที่สมบูรณ์และสม่ำเสมอ จุดประสงค์ของการปรับระบบแสงของ Kuhler คือเพื่อให้ได้แสงสว่างที่สม่ำเสมอและเพียงพอสำหรับขอบเขตการมองเห็นที่สังเกตได้ และเพื่อป้องกันไม่ให้แสงเล็ดลอดกระทบหรือรบกวนระบบภาพ เพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดฝ้าบนฟิล์มระหว่างการถ่ายภาพ ส่วนประกอบที่จำเป็นสำหรับระบบไฟส่องสว่างของ Kohler แบบปรับค่าสูง: ไดอะแฟรมสนาม ระบบเลนส์คอนเดนเซอร์ที่ปรับได้บนแกน ① เลือกเลนส์ใกล้วัตถุ 10× และเลนส์ใกล้ตา 10× ② ใส่เลนส์ด้านหน้าของคอนเดนเซอร์เข้าไปในเส้นทางออปติคัล ปรับไดอะแฟรมรูรับแสงให้อยู่ในตำแหน่งปานกลาง (ไม่ใหญ่หรือเล็กเกินไป) จากนั้นยกคอนเดนเซอร์ไปที่ ตำแหน่งบนสุด และปรับแท่นหมุนคอนเดนเซอร์ไปที่ตำแหน่ง "J" ของช่องสว่าง ③ ปรับไดอะแฟรมของช่องให้ต่ำสุด (0.1)

④ วางตัวอย่างชีวภาพที่ปิดสนิทไว้บนเวที เปิดแหล่งกำเนิดแสง และโฟกัสให้ชัดเจน

⑤ จะมีพื้นที่สว่างบางส่วนหรือจุดสว่างในขอบเขตการมองเห็น ซึ่งเป็นภาพที่เบลอของไดอะแฟรมฟิลด์ ซึ่งสามารถมองเห็นรายละเอียดของตัวอย่างได้อย่างชัดเจน นอกนั้นเป็นขอบเขตการมองเห็นที่มืดกว่าซึ่งอาจไม่จำเป็นต้องเห็นรายละเอียดของตัวอย่างชัดเจน

⑥ปรับคอนเดนเซอร์ลงเล็กน้อย เพื่อให้จุดสว่างในขอบเขตการมองเห็นค่อยๆ ลดลง และค่อยๆ กลายเป็นภาพหลายเหลี่ยมที่ชัดเจน ซึ่งเป็นภาพที่ชัดเจนของไดอะแฟรมฟิลด์

⑦โดยทั่วไป ภาพเหลี่ยมไม่ได้อยู่กึ่งกลางของขอบเขตการมองเห็น และจำเป็นต้องปรับสกรูที่อยู่ตรงกลางคู่ของคอนเดนเซอร์เพื่อปรับภาพเหลี่ยมของไดอะแฟรมของสนามให้อยู่ในตำแหน่งกึ่งกลาง

⑧ค่อย ๆ เปิดไดอะแฟรมของขอบเขตการมองเห็นเพื่อทำให้รูปหลายเหลี่ยมเป็นรูปหลายเหลี่ยมที่จารึกไว้ของขอบเขตการมองเห็น และตรวจสอบสถานะการจัดตำแหน่งเพิ่มเติม หากการจัดตำแหน่งไม่เหมาะสม ให้ปรับสกรูปรับตำแหน่งอย่างละเอียดต่อไป

⑨เปิดไดอะแฟรมของขอบเขตการมองเห็นเล็กน้อย เพื่อให้ภาพหลายเหลี่ยมหายไปบนขอบของขอบเขตการมองเห็น จนถึงขณะนี้ การปรับระบบส่องสว่างของ Kohler เสร็จสมบูรณ์แล้ว หลังจากปรับระบบไฟของ Kohler แล้ว ขอบเขตการมองเห็นทั้งหมดจะสว่างเท่ากัน และภาพที่ถ่ายด้วยไมโครกราฟจะสว่างและชัดเจนด้วยคอนทราสต์ปกติ