การใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงกลับหัวอย่างเหมาะสม
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวเป็นกล้องจุลทรรศน์มัลติฟังก์ชั่นที่ใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ชีวภาพระดับไฮเอนด์ โครงสร้างซับซ้อนและมีราคาแพง ดังนั้น เพื่อให้นักศึกษาแพทย์เข้าใจการทำงานและการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์หัวกลับได้อย่างถูกต้อง อาจารย์จะต้องสาธิตการทำงานจริงของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวก่อน ก่อนหน้านี้ ได้มีการจัดตั้งหลักสูตรเพื่อเรียนรู้ความรู้พื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัว แนะนำโครงสร้าง หลักการ หน้าที่ และวิธีการใช้งานพื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัว จากนั้นจึงแสดงการทำงานเฉพาะสำหรับตัวอย่างต่างๆ เพื่อแสดงหน้าที่ต่างๆ ตั้งแต่ระยะตื้น ลงลึกทีละน้อย เพื่อสร้างมาตรฐานการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์กลับหัวของนักศึกษาแพทย์
1. การใช้การสังเกตการณ์ในทุ่งสว่างอย่างถูกวิธี หน้าที่อย่างหนึ่งของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวคือการสังเกตสนามแสง หลักการพื้นฐานคือหลังจากที่ชิ้นงานได้รับการฉายแสงแล้ว การดูดกลืนแสงของแต่ละส่วนจะแตกต่างกันเพื่อให้ได้ภาพที่มีพื้นหลังสว่าง เหมาะอย่างยิ่งสำหรับเซลล์ที่ย้อมสีหรือเซลล์ที่มีสี การสังเกตตัวอย่าง เช่น ส่วนของเนื้อเยื่อ
2. การใช้การสังเกตคอนทราสต์ของเฟสอย่างถูกต้อง หน้าที่ที่สองของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับด้านคือการสังเกตคอนทราสต์ของเฟส หลักการพื้นฐานของมันคือการแปลงความแตกต่างของเส้นทางแสงของส่วนต่างๆ ของตัวอย่างให้เป็นความแตกต่างของแอมพลิจูด การสังเกตทำได้ผ่านเลนส์ใกล้วัตถุคอนทราสต์เฟสพร้อมแผ่นเฟสและเลนส์คอนเดนเซอร์ที่มีไดอะแฟรมวงแหวน ส่วนใหญ่จะนำไปใช้กับการสังเกตเซลล์ที่มีชีวิตหรือส่วนของเนื้อเยื่อที่ไม่เปื้อน ในกระบวนการสอนเชิงทดลอง นอกเหนือจากการชี้แนะนักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษาทางการแพทย์อย่างถูกต้องในการสังเกตวิธีการใช้งานพื้นฐานของการสังเกตคอนทราสต์ของเฟส สิ่งสำคัญคือต้องแนะนำพวกเขา ทำความเข้าใจและเชี่ยวชาญในตัวอย่างที่ใช้สำหรับการสังเกตคอนทราสต์ของเฟส สำหรับพวกเขาแล้ว การสังเกตเซลล์เพาะเลี้ยงด้วยกล้องจุลทรรศน์เป็นวิธีที่ใช้กันมากที่สุดในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ในอนาคต ก่อนอื่น สำหรับการเลือกอุปกรณ์เซลล์ โดยทั่วไปแนะนำให้ใช้แก้วและจานเพาะเชื้อพลาสติก จานเพาะเชื้อ และขวดเพาะเชื้อ ส่วนใหญ่ไม่มีสีและโปร่งใส และสามารถสังเกตได้โดยตรงบนกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบกลับหัว โดยไม่ต้องเทของเหลวในเซลล์และการรักษาอื่นๆ ประการที่สอง ในระหว่างการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ อย่าเปิดฝาครอบอุปกรณ์ตามต้องการ เพื่อไม่ให้เซลล์ปนเปื้อน ประการสุดท้าย สำหรับผู้ปฏิบัติงาน พวกเขาจำเป็นต้องสวมถุงมือ หน้ากาก และเสื้อโค้ทสีขาว ซึ่งไม่เพียงแต่สามารถปกป้องสุขภาพของตนเองเท่านั้น แต่ยังป้องกันการปนเปื้อนของเซลล์อีกด้วย
3. การใช้การสังเกตการเรืองแสงอย่างถูกต้อง หน้าที่ที่สามของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงกลับหัวคือการสังเกตการเรืองแสง หลักการพื้นฐานคือการใช้แสงกระตุ้นเพื่อกระตุ้นตัวอย่างให้เกิดการเรืองแสง เพื่อให้สังเกตรูปร่างและตำแหน่งของตัวอย่างได้ เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกตตัวอย่างที่มีฉลากเรืองแสง การสังเกตการเรืองแสงเป็นหน้าที่สำคัญของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์กลับด้าน และอุปกรณ์เสริมมีราคาแพงและใช้งานเป็นพิเศษ เพื่อให้นักศึกษาแพทย์สามารถเข้าใจการผ่าตัดและการใช้การสังเกตการเรืองแสงได้อย่างถูกต้อง อาจารย์ไม่ควรสอนเพียงวิธีการดำเนินงานขั้นพื้นฐานเท่านั้น แต่ที่สำคัญกว่านั้นควรสอนให้พวกเขาเชี่ยวชาญเป็นพิเศษ ก่อนอื่น ในการเตรียมชิ้นงาน กระจกสไลด์และกระจกครอบควรมีพื้นผิวเรียบและมีความหนาที่เหมาะสม (กระจกสไลด์ควรอยู่ระหว่าง 0.8 มม. ถึง 1.2 มม. และกระจกครอบควรมีขนาดประมาณ { {5}}.17 มม.); ชิ้นงานควรมีความหนาที่เหมาะสมและหลีกเลี่ยงไม่ให้เซลล์ซ้อนทับกันหรือถูกกำบังด้วยสิ่งเจือปน สื่อการติดตั้งควรใช้ส่วนผสมของกลีเซอรอลและคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ในปริมาตรที่เท่ากัน (0.5mol/L pH9.0-9.5) ประการที่สอง ก่อนการสังเกตการณ์ด้วยหลอดฟลูออเรสเซนต์ ควรปิดไฟไฟฟ้าในห้องและแสงสีขาวของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวเพื่อให้แน่ใจว่าสภาพแวดล้อมในห้องมืด สุดท้าย ในการสังเกตการเรืองแสง ควรควบคุมเวลาการสังเกตอย่างเคร่งครัด โดยทั่วไป 1-2 ชั่วโมง/ครั้งจะเหมาะสม มิฉะนั้น การเรืองแสงจะอ่อนลงและหายไป เมื่อปรับแหล่งกำเนิดแสง ให้สวมแว่นตาป้องกันเพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหายจากรังสีอัลตราไวโอเลตต่อแว่นตา
4. การใช้ภาพที่ถูกต้อง ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ ไม่เพียงแต่ต้องการให้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวสามารถรับรู้การสังเกตต่างๆ ได้ แต่ยังต้องการให้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์กลับหัวสามารถจับภาพได้ ระบบกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์กลับหัวเป็นการรวมกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเข้ากับคอมพิวเตอร์ผ่านการแปลงโฟโตอิเล็กทริก ไม่เพียงแต่สำหรับการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์บนช่องมองภาพเท่านั้น แต่ยังสำหรับการสังเกต การแก้ไข และบันทึกภาพแบบไดนามิกแบบเรียลไทม์บนคอมพิวเตอร์ด้วย
