วิธีการส่องสว่าง Darkfield สำหรับการสังเกตอนุภาคด้วยกล้องจุลทรรศน์
1. แสงโปร่งแสง
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพมักใช้เพื่อสังเกตตัวอย่างที่โปร่งใสและต้องการแสงสว่างด้วยแสงที่ส่องผ่าน วิธีการให้แสงสว่างมีสองประเภท
(1) แหล่งกำเนิดแสงส่องสว่างวิกฤตจะถูกถ่ายภาพบนระนาบวัตถุหลังจากผ่านเลนส์คอนเดนเซอร์ ดังแสดงในรูปที่ 5 หากไม่สนใจการสูญเสียพลังงานแสง ความสว่างของภาพของแหล่งกำเนิดแสงจะเหมือนกับความสว่างของแหล่งกำเนิดแสงเอง ดังนั้นวิธีนี้จึงเทียบเท่ากับการวางแหล่งกำเนิดแสงบนระนาบวัตถุ แน่นอนว่าในการส่องสว่างวิกฤต หากความสว่างพื้นผิวของแหล่งกำเนิดแสงไม่เท่ากันหรือแสดงโครงสร้างเล็กๆ ที่ชัดเจน เช่น เส้นใย จะส่งผลร้ายแรงต่อเอฟเฟกต์การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ ซึ่งเป็นข้อเสียของการส่องสว่างวิกฤต วิธีแก้ไขคือวางฟิลเตอร์สีดูดซับความร้อนและสีขาวขุ่นไว้ด้านหน้าแหล่งกำเนิดแสงเพื่อให้แสงสว่างมีความสม่ำเสมอมากขึ้น และหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแหล่งกำเนิดแสงในระยะยาว-ซึ่งอาจสร้างความเสียหายให้กับวัตถุที่กำลังตรวจสอบได้ เมื่อส่องสว่างด้วยแสงที่ส่องผ่าน มุมรูรับแสงของลำแสงถ่ายภาพของเลนส์ใกล้วัตถุจะถูกกำหนดโดยมุมรูรับแสงของลำแสงสี่เหลี่ยมของกระจกโฟกัส เพื่อที่จะใช้รูรับแสงตัวเลขของเลนส์ใกล้วัตถุอย่างเต็มที่ เลนส์โฟกัสควรมีรูรับแสงตัวเลขที่เท่ากันหรือใหญ่กว่าเล็กน้อยเป็นเลนส์ใกล้วัตถุ
(2) ข้อเสียของการส่องสว่างบนพื้นผิวที่ไม่สม่ำเสมอในแสงวิกฤตของแสง Kola สามารถกำจัดได้ในแสง Kola เพิ่มสปอตไลต์เสริม 2 ระหว่างแหล่งกำเนิดแสง 1 และสปอตไลท์ 5 ดังแสดงในรูปที่ 6 จะเห็นได้ว่าเนื่องจากเลนส์คอนเดนเซอร์เสริม 2 (หรือที่เรียกว่ากระชอน) ที่ได้รับแสงสว่างสม่ำเสมอจากแหล่งกำเนิดแสงไม่ได้ถูกนำมาใช้โดยตรงในการถ่ายภาพชิ้นงาน 6 ดังนั้นขอบเขตการมองเห็น (ชิ้นงาน) ของเลนส์ใกล้วัตถุจึงได้รับแสงสว่างสม่ำเสมอ
2. ไฟส่องสว่างตก
เมื่อสังเกตวัตถุทึบแสง เช่น แผ่นเจียรโลหะผ่านกล้องจุลทรรศน์ทางโลหะวิทยา มักใช้การให้แสงสว่างจากด้านข้างหรือด้านบน ณ จุดนี้ ไม่มีกระจกปกคลุมบนพื้นผิวของวัตถุที่สังเกตได้ และการก่อตัวของภาพตัวอย่างจะขึ้นอยู่กับแสงสะท้อนหรือกระเจิงที่เข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุ ดังแสดงในรูปที่ 7
3. วิธีการส่องสว่างสำหรับการสังเกตอนุภาคโดยใช้ขอบเขตการมองเห็นที่มืด
วิธีสนามมืดสามารถใช้เพื่อสังเกตอนุภาคขนาดเล็กมากได้ สิ่งที่เรียกว่า-อนุภาคละเอียดมากหมายถึงอนุภาคเล็กๆ เหล่านั้นที่มีขนาดเล็กกว่าขีดจำกัดความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ หลักการของการส่องสว่างสนามมืดคือการป้องกันไม่ให้แสงส่องสว่างหลักเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุ และมีเพียงแสงที่กระจัดกระจายจากอนุภาคเท่านั้นที่สามารถเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุเพื่อการถ่ายภาพได้ ดังนั้น ภาพของอนุภาคสว่างจึงได้รับบนพื้นหลังสีเข้ม และแม้ว่าพื้นหลังของขอบเขตการมองเห็นจะมืด แต่คอนทราสต์ก็ดี ซึ่งสามารถปรับปรุงความละเอียดได้
