การประยุกต์ใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมด
TIRFM (กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนส์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมด) กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมด เมื่อแสงเข้าสู่ตัวกลางที่มีดัชนีการหักเหของแสงต่ำกว่าจากตัวกลางที่มีดัชนีหักเหสูง หากมุมตกกระทบมากพอ แสงทั้งหมดจะสะท้อนกลับโดยไม่หักเห แต่ในอินเทอร์เฟซของสื่อทั้งสองสร้างคลื่นระเหยที่สามารถกระตุ้นการเรืองแสงภายใน 100 นาโนเมตรใกล้กับอินเทอร์เฟซเพื่อให้สังเกตพื้นผิวของวัตถุได้ แสงกระตุ้นสามารถส่งผ่านตัวเรืองแสงของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ทั่วไปหรือตัวเรืองแสงพิเศษ และสามารถควบคุมมุมตกกระทบของเลเซอร์ได้ วิธีการกระตุ้นสนามทันทีใช้เพื่อป้องกันไม่ให้แสงกระตุ้นเข้าสู่เครื่องตรวจจับ แสงกระตุ้นที่ส่วนต่อประสานระหว่างแก้วและน้ำทำให้เกิดการสะท้อนแสงภายในอย่างสมบูรณ์ เนื่องจากการลดทอนแสงแบบเอ็กซ์โพเนนเชียล เฉพาะพื้นที่ตัวอย่างที่อยู่ใกล้กับพื้นผิวการสะท้อนทั้งหมดเท่านั้นที่จะสร้างการสะท้อนแสงแบบเรืองแสง ซึ่งช่วยลดการรบกวนของสัญญาณรบกวนของแสงพื้นหลังไปยังเป้าหมายการสังเกตได้อย่างมาก ดังนั้นเทคโนโลยีนี้จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการสังเกตการณ์แบบไดนามิก ของสารที่ผิวเซลล์
แผนผังของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมด (TIRFM)
①Sample ②Evanescent wave range ③Cover glass ④Oil immersion ⑤Target ⑥Emission beam (สัญญาณ) ⑦Excitation beam
เพื่อให้เกิดการสะท้อนภายในทั้งหมด จำเป็นต้องมีมุมตกกระทบขนาดใหญ่ ตัวอย่างเช่น มุมตกกระทบที่ส่วนต่อประสานกับน้ำแก้วมากกว่า 61 องศา สิ่งนี้สามารถทำได้ด้วยปริซึมที่เรียกว่า TIRFM ที่ใช้ปริซึม หรือโดยเลนส์ใกล้วัตถุที่มีรูรับแสงเป็นตัวเลขสูง ซึ่งเรียกว่า TIRFM ประเภทวัตถุ กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมดที่มีจำหน่ายในท้องตลาดโดยทั่วไปเป็นประเภทเลนส์ใกล้วัตถุที่มีความเร็วสูงและความแม่นยำสูง
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบสะท้อนแสงภายในทั้งหมดถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในสาขาชีววิทยาบางสาขา เนื่องจากสามารถตรวจจับการเรืองแสงในช่วงที่บางมาก (น้อยกว่า 100 นาโนเมตร) บนพื้นผิวของวัตถุได้ เช่นแอปพลิเคชันต่อไปนี้:
การสังเกตภาพพื้นผิวเซลล์: โครงสร้างพื้นผิวเยื่อหุ้มเซลล์, การสัมผัสผิวเซลล์, การเปลี่ยนแปลงของพื้นผิวเมมเบรน/การแปลโปรตีน
การสังเกตและการจัดการโมเลกุลเดี่ยว: myosin, actin และ Cy3-ที่ระบุว่า ATP
การเคลื่อนตัวของผิวเยื่อหุ้มเซลล์ เช่น การกลืนตุ่มพอง การหายใจออกของถุงน้ำ และต่อมไร้ท่อของถุงน้ำ เดอะ
การสังเกตปรากฏการณ์การสปาร์คของแคลเซียมในเยื่อหุ้มเซลล์ การตรวจสอบช่องไอออน
การวิจัยมอเตอร์ระดับโมเลกุล: มอเตอร์แบบหมุน, โปรตีนไซโตสเกเลทัล, โพลิเมอร์, จีโปรตีน, โปรตีนวงแหวน, มอเตอร์นิวคลีโอไทด์
นอกเหนือไปจากสาขาชีววิทยาแล้ว ยังมีการใช้งานที่ดีในสาขาเคมีสำหรับการสังเกตโครงสร้างโมเลกุลทางเคมี
