ชีวจุลทรรศน์เกี่ยวกับปริมาตรของบล็อกเนื้อเยื่อ
จุลทรรศน์ชีวภาพ จนถึงขณะนี้ การตรึงด้วยความเย็น การแช่แข็งส่วนบางเฉียบ และการทำให้แห้งด้วยน้ำแข็งเป็นวิธีการประจำสำหรับเนื้อเยื่อและเซลล์เอ็กซเรย์จุลภาค รายละเอียดของวิธีนี้อธิบายได้ดังนี้
สำหรับกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพที่มีคอนเดนเซอร์ สามารถเลื่อนคอนเดนเซอร์ขึ้นและลงเพื่อให้ความสว่างอยู่ในระดับปานกลาง และยังสามารถเปลี่ยนรูรับแสงของแสงแบบปรับได้เพื่อให้ได้ความสว่างระดับปานกลาง 9b หากแสงมีแดด สามารถยกคอนเดนเซอร์ขึ้นได้อย่างเหมาะสม และรูรับแสงของแหล่งกำเนิดแสงแบบแปรผันสามารถขยายได้อย่างเหมาะสม หากแสงจ้าเกินไป เลนส์คอนเดนเซอร์จะลดลงอย่างเหมาะสม และลดรูรับแสงของแสงที่ตัดกันอย่างเหมาะสม หากคุณยังรู้สึกตาพร่าในกรณีนี้ คุณสามารถเลือกตัวกรองที่เหมาะสมและวางไว้บนตัวยึดใต้คอนเดนเซอร์ ต้นโอ๊กนี้ก็จะได้ความสว่างสมใจ แน่นอนว่าการปรับตำแหน่งบนและล่างของคอนเดนเซอร์ การปรับขนาดรูรับแสงของการอ่านค่าออปติคอลแบบแปรผัน และการเลือกฟิลเตอร์ที่เหมาะสมนั้นต้องอาศัยการฝึกฝนเป็นระยะเวลาหนึ่งเพื่อให้ได้ประสบการณ์
ประเด็นที่สำคัญมากในกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพคือ ในกระบวนการสุ่มตัวอย่างและแยกเซลล์ หลังจากการทำให้แห้งแบบเยือกแข็งและการฝังเรซิน (FD) หลังจากการแช่แข็งมวลรวมแบบบางพิเศษ และหลังจากการทำให้แห้งแบบเยือกแข็ง เนื้อหาของธาตุ 65 ชนิดในแต่ละส่วน ต้องจัดการอย่างระมัดระวัง เซลล์ที่จะวิเคราะห์ไม่สามารถเสียหายได้ เนื่องจาก X-ray microanalysis ไม่เพียงแต่เกี่ยวข้องกับหลายขั้นตอนเท่านั้น แต่ยังมีค่าใช้จ่ายสูงอีกด้วย หากเซลล์ที่วิเคราะห์เป็นเซลล์ที่เสียหายหรือเซลล์ที่ตายแล้วหลังจากผ่านไปนานและผ่านการประมวลผลหลายขั้นตอน เป็นเรื่องที่น่าเสียใจอย่างยิ่งหากได้ข้อสรุปที่ไม่ถูกต้อง ตัวอย่างเช่น cardiomyocytes ที่แยกจากกันโดยการรักษาด้วย collagenase มีสองรูปแบบ รูปแบบหนึ่งเป็นแท่งยาว
Biomicroscopy ปริมาณและการกระจายของอิเล็กโทรไลต์ในเซลล์ทั้งสองประเภทนี้มีความแตกต่างกันค่อนข้างมาก Na สูงมากและ K ต่ำมากใน cardiomyocytes แบบวงกลม และความเข้มข้นของ ca ในไส้เดือนฝอยก็สูงมาก หลังจากตรวจสอบด้วยวิธีการวิเคราะห์อื่น ๆ แล้ว ก็พิสูจน์ได้ว่า Na สูงและ K ต่ำของเซลล์กลมและ Ca สูงในไมโทคอนเดรียนั้นเกิดจากความเสียหายของเยื่อหุ้มเซลล์ในระหว่างกระบวนการแยกเซลล์ วิธีการตรึงเซลล์และเนื้อเยื่อด้วยความเย็นด้วยน้ำแข็งมักจะใช้การดับและการตรึงก่อน จากนั้นจึงเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว การตรึงการดับเป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับผลของการถนอมอาหาร เซลล์ที่มีชีวิตหรือเนื้อเยื่อสดจะอุดมไปด้วยน้ำ เมื่อดับไฟ ส่วนของเซลล์หรือเนื้อเยื่อที่สัมผัสโดยตรงกับสารทำความเย็นที่บดแล้ว (โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อดับด้วยไนโตรเจนเหลว) มักจะถูกแช่แข็งและจับตัวเป็นก้อนก่อน จึงเกิดเป็น "เปลือก" ซึ่งกีดขวางส่วนกลางของเซลล์ บดและเย็นคงที่ ดังนั้นเมื่อทำการวิเคราะห์ X-line micro-area จึงมักพบว่ามีผลึกน้ำแข็งอยู่ตรงกลางเซลล์ขนาดใหญ่กว่า เพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งนี้เกิดขึ้น สารที่มีจุดหลอมเหลวสูงกว่าไนโตรเจนเหลวแต่ต่ำกว่า 806c จะถูกใช้เป็นสารทำความเย็นที่แตกตัว มีสารดังกล่าวมากมาย แต่สารที่หาได้ง่ายที่สุดและถูกที่สุดคือโพรเพนเข้มข้น (จุดเดือด - 42.120c, จุดหลอมเหลว - 187.10c, น้ำหนักโมเลกุล 44.1) และความเร็วในการทำความเย็นเร็วที่สุด . แต่ข้อเสียคือติดไฟได้
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพสามารถวางเส้นใยกล้ามเนื้อบนชั้นวางพิเศษ เพื่อที่ว่าเมื่อการหดตัวของเส้นใยกล้ามเนื้อถึงระยะหนึ่งและจำเป็นต้องแก้ไข ให้เริ่มหัวฉีดทันทีเพื่อฉีดโพรเพนเหลวไปยังเส้นใยกล้ามเนื้อเพื่อดับและแก้ไข จากนั้นจึงนำเส้นใยกล้ามเนื้อพร้อมกับโครงออกและใส่ลงในไนโตรเจนเหลว หากต้องการตรึงเซลล์เม็ดเลือดหรือเซลล์ที่แยกออกมา ก่อนอื่นให้รวมเซลล์ด้วยการปั่นแยกด้วยความเร็วต่ำ ย้ายเซลล์ไปยังขวดสีเงินที่มีค่าการนำความร้อนที่ดี วางขวดในโพรเพนเหลว และแช่แข็งเพื่อตรึง เมื่อซ่อมตับอ่อนของหนูในห้องปฏิบัติการ Hall ก้อนเหล็กสองก้อนจะถูกทำให้เย็นก่อนด้วยฮีเลียมเหลว (หรือไนโตรเจนเหลว) และก้อนทองแดงสองก้อนจะถูกหนีบด้วยคีมและวางไว้ที่ด้านหน้าและด้านหลังของตับอ่อนเพื่อดับและแก้ไข ตับอ่อน เนื้อเยื่อหรือเซลล์สามารถเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาในระยะยาวหลังจากการดับและตรึง
จุลทรรศน์ชีวภาพ นอกจากวิธีการแยกส่วนบางเฉียบแบบเยือกแข็งที่ได้รับการยอมรับมากที่สุดในปัจจุบันแล้ว นี่เป็นอีกเทคนิคหนึ่งที่ใช้โดยนักวิทยาศาสตร์ สารจะถูกเติมเพื่อสร้างตะกอนโดยมีส่วนประกอบที่จะวิเคราะห์เพื่อทำให้เคลื่อนที่ไม่ได้ก่อนการวิเคราะห์ จากนั้นจึงวิเคราะห์ตะกอน ตัวอย่างเช่น ผู้คนมักจะใช้ oxalate และ pyroantimonate เพื่อฝาก ca ไว้ในเซลล์กล้ามเนื้อ อดีตไม่ไวพอต่อความเข้มข้นต่ำของ Ca ในไซโตพลาสซึม ไพโรแอนติโมเนตมีความไวมากกว่าและสามารถสร้างการสะสมของอิเล็กตรอนหนาแน่นโดยมี Ca อิสระในสมอง แต่ไพโรแอนติโมเนตไม่เข้ากันกับโซเดียม แมงกานีส แบเรียม เหล็ก การสะสมของไพโรแอนติโมเนตก็จะเกิดขึ้นเช่นกันและมีความเฉพาะเจาะจงน้อยกว่า ขั้นตอนการเตรียมชิ้นงานคล้ายกับการเตรียมชิ้นงานบางเฉียบด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านธรรมดา ความแตกต่างคือโพแทสเซียมไพโรแอนติโมเนต 3 เปอร์เซ็นต์ (น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.6) จะถูกตรึงไว้ 6 ชั่วโมงก่อนทำการตรึง และบนชิ้นส่วนบางเฉียบของกล้ามเนื้อย้อมสี คราบดำถูกพบที่กึ่งกลางของแถบ A และ 2 ของซาร์โคเมียร์แต่ละอัน และส่วนที่ไม่มีการย้อมสีถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ด้วยรังสีเอกซ์ขนาดเล็ก Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) ถูกนำมาใช้เพื่อตกตะกอนสารที่มี heme เป็นต้น การรวมกันของปฏิกิริยาการตกตะกอนของฮิสโตเคมีและสะพานเอ็กซเรย์ไมโครดิฟเฟอเรนติเอชันสามารถพิจารณาได้ในห้องปฏิบัติการที่ไม่มีสภาวะของส่วนบางเฉียบเยือกแข็ง เชิงปริมาณสามารถทำได้ตามความสูงสูงสุดขององค์ประกอบที่จะวิเคราะห์
