การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพเกี่ยวกับปริมาตรของบล็อกเนื้อเยื่อ
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ จนถึงขณะนี้ การตรึงด้วยความเย็น ส่วนบางเฉียบแช่แข็ง และการทำแห้งแบบแช่แข็งเป็นวิธีการปกติสำหรับการตรวจเอกซเรย์เนื้อเยื่อและเซลล์ รายละเอียดของวิธีนี้มีอธิบายดังนี้:
สำหรับกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพที่มีคอนเดนเซอร์ สามารถเลื่อนคอนเดนเซอร์ขึ้นและลงเพื่อให้ความสว่างปานกลาง และสามารถเปลี่ยนรูรับแสงของแสงที่แปรผันได้เพื่อให้ได้ความสว่างปานกลาง 9b หากมีแสงแดดจัด คอนเดนเซอร์สามารถยกขึ้นได้อย่างเหมาะสม และสามารถขยายรูรับแสงของแหล่งกำเนิดแสงที่แปรผันได้อย่างเหมาะสม หากแสงจ้าเกินไป เลนส์คอนเดนเซอร์สามารถลดระดับลงได้อย่างเหมาะสม และลดรูรับแสงของแสงที่ตัดกันอย่างเหมาะสม หากคุณยังคงรู้สึกตื่นตาในกรณีนี้ คุณสามารถเลือกตัวกรองที่เหมาะสมและวางไว้บนโครงยึดใต้คอนเดนเซอร์ได้ ต้นโอ๊กนี้จะสามารถรับความสว่างที่ตรงใจคุณได้ แน่นอนว่า การปรับตำแหน่งบนและล่างของคอนเดนเซอร์ การปรับขนาดรูรับแสงของการอ่านค่าแสงแบบแปรผัน และการเลือกฟิลเตอร์ที่เหมาะสมนั้นต้องใช้เวลาฝึกฝนสักระยะหนึ่งจึงจะได้รับประสบการณ์
ปัญหาที่สำคัญมากในกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพคือในกระบวนการสุ่มตัวอย่างและแยกเซลล์ หลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็งและการฝังเรซิน (FD) หลังจากการแช่แข็งมวลรวมที่บางเฉียบ และหลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็ง จะมีองค์ประกอบ 65 ชนิดในแต่ละส่วน จะต้องได้รับการจัดการอย่างระมัดระวัง เซลล์ที่จะวิเคราะห์ไม่สามารถเสียหายได้ เนื่องจากการวิเคราะห์ระดับจุลภาคด้วยรังสีเอกซ์ไม่เพียงเกี่ยวข้องกับหลายขั้นตอนเท่านั้น แต่ยังมีค่าใช้จ่ายสูงอีกด้วย หากเซลล์ที่วิเคราะห์เป็นเซลล์ที่เสียหายหรือเซลล์ที่ตายแล้วหลังจากใช้เวลานานและผ่านการประมวลผลหลายขั้นตอน เป็นเรื่องน่าเสียใจอย่างยิ่งที่สรุปผลผิดพลาด ตัวอย่างเช่น คาร์ดิโอไมโอไซต์ที่แยกจากกันโดยการรักษาด้วยคอลลาจีเนสจะมีรูปทรงสองแบบ รูปทรงหนึ่งเป็นรูปแท่งยาว และอีกรูปทรงทรงกลม ส่วนหลังคือเซลล์ที่กำลังจะตายซึ่งได้รับความเสียหายระหว่างการแยกเซลล์
Biomicroscopy ปริมาณและการกระจายของอิเล็กโทรไลต์ในเซลล์ทั้งสองชนิดนี้ค่อนข้างแตกต่างกัน Na สูงมาก และ K ต่ำมากในคาร์ดิโอไมโอไซต์แบบวงกลม และความเข้มข้นของ Ca ในไส้เดือนฝอยสูงมาก หลังจากตรวจสอบด้วยวิธีการวิเคราะห์อื่นๆ แล้ว พบว่าค่า Na สูงและ K ต่ำของเซลล์ทรงกลม และ Ca ที่สูงในไมโตคอนเดรีย เกิดจากความเสียหายของเยื่อหุ้มเซลล์ในระหว่างกระบวนการแยกเซลล์ วิธีการตรึงเซลล์และเนื้อเยื่อด้วยความเย็นด้วยน้ำแข็งมักจะใช้การชุบแข็งและการตรึงก่อน แล้วจึงเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว การตรึงการชุบแข็งมีความสำคัญมากต่อผลของการเก็บรักษา เซลล์ที่มีชีวิตหรือเนื้อเยื่อสดอุดมไปด้วยน้ำ เมื่อดับชิ้นส่วนของเซลล์หรือเนื้อเยื่อที่สัมผัสโดยตรงกับสารทำความเย็นที่ถูกบด (โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อดับด้วยไนโตรเจนเหลว) มักจะถูกแช่แข็งและตรึงไว้ก่อน จึงเกิดเป็น "เปลือก" ซึ่งเป็นอุปสรรคต่อ ส่วนกลางของเซลล์ถูก บดและตรึงเย็น ดังนั้นเมื่อทำการวิเคราะห์พื้นที่จุลภาคด้วย X-line จึงมักพบว่ามีผลึกน้ำแข็งอยู่ตรงกลางของเซลล์ขนาดใหญ่ เพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งนี้เกิดขึ้น สารที่มีจุดหลอมเหลวสูงกว่าไนโตรเจนเหลวแต่ต่ำกว่า 806c จะถูกนำมาใช้เป็นสารทำความเย็นที่แตกหัก มีสารประเภทนี้อยู่มากมาย แต่สารที่ถูกที่สุดคือโพรเพนเข้มข้น (จุดเดือด - 42.120c, จุดหลอมเหลว - 187.10c, น้ำหนักโมเลกุล 44.1) และความเร็วในการทำความเย็นจะเร็วที่สุด แต่ข้อเสียคือมันติดไฟได้
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพสามารถนำเส้นใยกล้ามเนื้อไปวางบนชั้นวางพิเศษได้ ดังนั้นเมื่อการหดตัวของเส้นใยกล้ามเนื้อถึงระยะหนึ่งและจำเป็นต้องแก้ไข ให้เริ่มหัวฉีดทันทีเพื่อพ่นโพรเพนเหลวไปที่เส้นใยกล้ามเนื้อเพื่อดับและแก้ไข จากนั้นนำเส้นใยกล้ามเนื้อและโครงออกแล้วใส่ลงในไนโตรเจนเหลว หากต้องการตรึงเซลล์เม็ดเลือดหรือเซลล์ที่แยกได้ ขั้นแรกให้รวมเซลล์โดยการปั่นแยกด้วยความเร็วต่ำ ย้ายเซลล์ไปยังขวดเงินที่มีการนำความร้อนได้ดี วางขวดในโพรเพนเหลว และแช่แข็งเพื่อตรึง เมื่อซ่อมตับอ่อนของหนูในห้องปฏิบัติการ Hall บล็อกเหล็กทั้งสองถูกทำให้เย็นด้วยฮีเลียมเหลว (หรือไนโตรเจนเหลว) ล่วงหน้า และบล็อกทองแดงทั้งสองถูกยึดด้วยคีมและวางไว้ที่ด้านหน้าและด้านหลังของตับอ่อนเพื่อดับและแก้ไข ตับอ่อน เนื้อเยื่อหรือเซลล์สามารถเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาในระยะยาวหลังจากการดับและตรึง
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ นอกเหนือจากวิธีการตัดชิ้นบางเฉียบแช่แข็งที่ได้รับการยอมรับมากที่สุดแล้ว ต่อไปนี้เป็นเทคนิคการสะสมอีกวิธีหนึ่งที่นักวิทยาศาสตร์ใช้ สารจะถูกเติมเพื่อสร้างตะกอนโดยมีส่วนประกอบที่จะวิเคราะห์เพื่อตรึงไว้ก่อนการวิเคราะห์ จากนั้นจึงวิเคราะห์ตะกอน ตัวอย่างเช่น ผู้คนมักใช้ออกซาเลตและไพโรแอนติโมเนตเพื่อสะสม Ca ไว้ในเซลล์กล้ามเนื้อ อดีตไม่ไวต่อความเข้มข้นต่ำของ Ca ในไซโตพลาสซึม ไพโรแอนติโมเนตมีความไวมากกว่าและสามารถสร้างการสะสมของอิเล็กตรอนหนาแน่นโดยมี Ca อิสระในสมอง แต่ไพโรแอนติโมเนตเข้ากันไม่ได้กับโซเดียม แมงกานีส แบเรียม เหล็ก ตะกอนก็ก่อตัวเช่นกันและมีความจำเพาะน้อยกว่า กระบวนการเตรียมตัวอย่างคล้ายกับการเตรียมตัวอย่างกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านแบบธรรมดา ความแตกต่างคือโพแทสเซียมไพโรแอนติโมเนต 3 เปอร์เซ็นต์ (น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 7.6) ได้รับการแก้ไขเป็นเวลา 6 ชั่วโมงก่อนการตรึง และบนส่วนบางเฉียบของกล้ามเนื้อที่เปื้อน พบสิ่งสะสมสีดำที่กึ่งกลางของแถบ A และ 2 ของซาร์โคเมียร์แต่ละอัน และส่วนที่ไม่มีรอยเปื้อนถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ระดับไมโครด้วยรังสีเอกซ์ Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) ถูกใช้เพื่อตกตะกอนสารที่มีฮีมและอื่นๆ การรวมกันของปฏิกิริยาการตกตะกอนของฮิสโตเคมีและสะพานเอ็กซ์เรย์ไมโครดิฟเฟอเรนทิเอชั่นสามารถพิจารณาได้ในห้องปฏิบัติการที่ไม่มีเงื่อนไขของส่วนบางเฉียบที่แช่แข็ง การวัดแบบกึ่งปริมาณสามารถทำได้ตามความสูงสูงสุดขององค์ประกอบที่จะวิเคราะห์
