การกำหนดจำนวนจุลินทรีย์ - วิธีการนับด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรง!
I. ข้อกำหนดด้านวัตถุประสงค์
1 เพื่อชี้แจงหลักการของการนับแผ่นฮีมาโตคริต
2 เชี่ยวชาญวิธีการนับจุลินทรีย์โดยใช้แผ่นฮีมาโตคริต
ครั้งที่สอง หลักการพื้นฐาน
วิธีการนับโดยตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์เป็นการแขวนตัวอย่างจำนวนเล็กน้อยเพื่อทดสอบบนสไลด์พิเศษที่มีพื้นที่และปริมาตรที่กำหนดไว้ (หรือที่เรียกว่าเครื่องนับแบคทีเรีย) ในกล้องจุลทรรศน์เพื่อนับโดยตรงด้วยวิธีที่ง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่าย ปัจจุบันตัวนับแบคทีเรียที่ใช้กันทั่วไปในประเทศและต่างประเทศ ได้แก่ แผ่นนับเม็ดเลือด ตัวนับแบคทีเรีย Peteroff-Hauser และตัวนับแบคทีเรีย Hawksley ฯลฯ ซึ่งสามารถใช้สำหรับยีสต์ แบคทีเรีย สปอร์ของเชื้อรา และสารแขวนลอยอื่น ๆ ของการนับ หลักการพื้นฐาน เหมือนกัน. ตัวนับสองประเภทหลังมีปริมาตรรวม 0.02 มม.3 หลังจากใส่แผ่นปิด และระยะห่างระหว่างแผ่นปิดและชิ้นพาหะเพียง 0.02 มม. ดังนั้นเซลล์ที่เล็กกว่า เช่น สามารถสังเกตและนับจำนวนแบคทีเรียได้โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อแช่น้ำมัน นอกจากการใช้เคาน์เตอร์เหล่านี้แล้ว ยังมีวิธีการประมาณอัตราส่วนของพื้นที่สเมียร์ต่อพื้นที่การมองเห็นที่สังเกตได้โดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ซึ่งโดยทั่วไปใช้สำหรับการตรวจทางแบคทีเรียในนมวัว ข้อดีของวิธีการนับด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรงคือใช้งานง่าย รวดเร็ว และใช้งานง่าย อย่างไรก็ตามข้อเสียของวิธีนี้คือผลลัพธ์มักจะเป็นผลรวมของสิ่งมีชีวิตและสิ่งมีชีวิตที่ตายแล้ว มีวิธีการบางอย่างที่จะเอาชนะข้อเสียนี้ เช่น การผสมผสานการเพาะเลี้ยงในห้องขนาดเล็กที่ย้อมด้วยแบคทีเรียที่มีชีวิต (ในระยะเวลาอันสั้น) และการเติมสารยับยั้งไซโตไคเนซิสเพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ในการนับเฉพาะสิ่งมีชีวิตที่มีชีวิต
ขั้นตอนการดำเนินงาน
1 การเตรียมสารแขวนลอยแบคทีเรีย
ใช้น้ำเกลือฆ่าเชื้อเพื่อทำให้แบคทีเรียแขวนลอยในยีสต์ของผู้ผลิตเบียร์ด้วยความเข้มข้นที่เหมาะสม
2, ห้องนับกระจก
ก่อนที่จะเพิ่มตัวอย่าง ควรตรวจสอบห้องนับของแผ่นนับก่อน หากมีสิ่งสกปรกต้องทำความสะอาดและเป่าให้แห้งก่อนนับ
3 การเพิ่มตัวอย่าง
แผ่นนับเซลล์เม็ดเลือดที่สะอาดและแห้งคลุมด้วยแผ่นปิด จากนั้นใช้บิวเรตต์ของเส้นเลือดฝอยที่ปราศจากเชื้อเพื่อเขย่าสารแขวนลอยยีสต์ของผู้ผลิตเบียร์จากขอบของแผ่นปิดเพื่อหยดหยดเล็กน้อย เพื่อให้ของเหลวของแบคทีเรียตามช่องว่างโดยการเจาะของเส้นเลือดฝอยเข้าไปใน ห้องนับโดยอัตโนมัติ โดยทั่วไปห้องนับสามารถเต็มไปด้วยของเหลวแบคทีเรีย เมื่อเก็บตัวอย่าง ควรเขย่าสารละลายแบคทีเรียก่อน เมื่อเพิ่มตัวอย่าง ห้องนับไม่ควรมีฟองอากาศ
4, การนับกล้องจุลทรรศน์
หลังจากเพิ่มตัวอย่างแล้ว ปล่อยให้พักเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นวางแผ่นนับเม็ดเลือดบนแท่นพาหะของกล้องจุลทรรศน์ ขั้นแรกให้ค้นหาตำแหน่งของห้องนับที่มีกำลังขยายต่ำ จากนั้นเปลี่ยนเป็นกำลังขยายสูงสำหรับการนับ ปรับความเข้มของแสงของกล้องจุลทรรศน์อย่างเหมาะสม สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่มีแสงสะท้อนแสงควรใส่ใจกับแสงไม่ควรเอนเอียงไปด้านใดด้านหนึ่ง มิฉะนั้น มุมมองจะไม่ง่ายที่จะลิ้นเส้นตารางห้องนับที่ชัดเจน หรือ เห็นแต่เส้นแนวตั้งหรือเห็นแต่เส้นแนวนอน หากพบว่าของเหลวจากแบคทีเรียมีความหนาหรือบางเกินไปก่อนที่จะนับ จำเป็นต้องปรับการเจือจางอีกครั้งก่อนนับ ข้อกำหนดทั่วไปในการเจือจางตัวอย่างประมาณ 5 ถึง 10 แบคทีเรียในแต่ละเซลล์มีความเหมาะสม สำหรับแต่ละห้องนับ แต่ละสิ่งมีชีวิตในช่องตรงกลาง 5 ช่อง (มุม 4 มุมและช่องตรงกลาง 1 ช่อง) จะถูกเลือกสำหรับการนับ สิ่งมีชีวิตที่อยู่บนเส้นตารางมักจะนับเฉพาะเส้นบนและเส้นขวาเท่านั้น ในกรณีของยีสต์ที่กำลังออกดอก เมื่อร่างกายที่ออกดอกมีขนาดถึงครึ่งหนึ่งของเซลล์แม่ จะนับเป็นสิ่งมีชีวิตสองชนิด การนับตัวอย่างจากห้องนับทั้งสองห้องในค่าเฉลี่ยเพื่อคำนวณปริมาณแบคทีเรียในตัวอย่าง
5. การทำความสะอาดแผ่นฮีมาโตคริต
หลังการใช้งานให้ล้างแผ่นนับเม็ดเลือดด้วยน้ำใต้ก๊อก ห้ามใช้วัตถุแข็งในการล้างและแปรง เช็ดให้แห้งด้วยตัวเอง หรือใช้ไดร์เป่าผมเป่าให้แห้งหลังล้าง ตรวจสอบแผ่นด้วยกล้องจุลทรรศน์เพื่อดูว่ามีสิ่งมีชีวิตตกค้างหรือตะกอนอื่น ๆ ในแต่ละช่องหรือไม่ ถ้าไม่สะอาดต้องซักซ้ำจนสะอาด
