ความแตกต่างและลักษณะเฉพาะระหว่างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์และกล้องจุลทรรศน์แสงธรรมดา
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แตกต่างจากกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไปตรงที่ไม่สามารถสังเกตตัวอย่างภายใต้แสงสว่างของแหล่งกำเนิดแสงธรรมดา แต่จะใช้แสงที่มีความยาวคลื่นจำนวนหนึ่ง (โดยปกติคือแสงอัลตราไวโอเลต แสงสีม่วงสีน้ำเงิน) เพื่อกระตุ้นสารเรืองแสงที่อยู่ภายในชิ้นงานทดสอบใต้กล้องจุลทรรศน์ ส่งผลให้สารเหล่านั้นเปล่งแสงเรืองแสงออกมา ดังนั้นบทบาทของแหล่งกำเนิดแสงในกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์จึงไม่ใช่การส่องสว่างโดยตรง แต่เป็นแหล่งพลังงานเพื่อกระตุ้นสารเรืองแสงภายในชิ้นงานทดสอบ เหตุผลที่เราสามารถสังเกตตัวอย่างไม่ได้เกิดจากการส่องสว่างของแหล่งกำเนิดแสง แต่เป็นปรากฏการณ์เรืองแสงที่แสดงโดยสารเรืองแสงภายในชิ้นงานหลังจากดูดซับพลังงานแสงที่ตื่นเต้น จากนี้ จะเห็นได้ว่าคุณลักษณะของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ส่วนใหญ่อยู่ที่แหล่งกำเนิดแสงสามารถจ่ายแสงกระตุ้นจำนวนมากในช่วงความยาวคลื่นเฉพาะ เพื่อให้สารเรืองแสงในชิ้นงานได้รับความเข้มของแสงกระตุ้นที่จำเป็น ในเวลาเดียวกัน กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์จะต้องมีระบบกรองที่สอดคล้องกัน กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงเป็นเครื่องมือพื้นฐานในเคมีของเนื้อเยื่อเรืองแสง ประกอบด้วยส่วนประกอบหลัก เช่น แหล่งกำเนิดแสงไฟฟ้าแรงสูงพิเศษ- ระบบตัวกรอง (รวมถึงแผ่นกรองการกระตุ้นและปราบปราม) ระบบการมองเห็น และระบบการถ่ายภาพ โดยจะใช้แสงที่มีความยาวคลื่นจำนวนหนึ่งเพื่อกระตุ้นชิ้นงานและปล่อยแสงเรืองแสงออกมา
1. วิธีการกระตุ้นด้วยแสงฟลูออเรสเซนซ์: ตามช่วงความยาวคลื่นของแสง มีสองประเภท: วิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวี (โดยใช้แสงอัลตราไวโอเลต) และวิธีการกระตุ้น BV (โดยใช้แสงสีม่วงสีน้ำเงิน) วิธีการกระตุ้นด้วยรังสียูวีใช้แสงอัลตราไวโอเลตใกล้กับแสงอัลตราไวโอเลตที่สั้นกว่า 400 นาโนเมตรในการกระตุ้น วิธีนี้ไม่มีแสงกระตุ้นที่มองเห็นได้ ดังนั้นการเรืองแสงที่สังเกตได้จะแสดงการเรืองแสงโดยธรรมชาติของสีย้อม ทำให้ง่ายต่อการแยกแยะการเรืองแสงที่จำเพาะบนชิ้นงานทดสอบจากการเรืองแสงในตัวเองของเนื้อเยื่อพื้นหลัง
2. วิธีการกระตุ้น BV: เป็นการกระตุ้นจากรังสีอัลตราไวโอเลตไปจนถึงแสงสีน้ำเงินที่มีศูนย์กลางอยู่ที่ 404 นาโนเมตรและ 434 นาโนเมตร วิธีนี้ใช้แสงสีน้ำเงินในการฉายรังสีชิ้นงาน ดังนั้น-ตัวกรองแบบตัดออกของระบบสังเกตการณ์ฟลูออเรสเซนซ์ต้องใช้ตัวกรองที่สามารถปิดกั้นแสงสีน้ำเงินได้อย่างสมบูรณ์และทะลุผ่านฟลูออเรสเซนต์สีเขียวและสีเหลืองที่ต้องการได้ทั้งหมด เม็ดสีเรืองแสงที่ใช้สำหรับวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี ความยาวคลื่นดูดกลืนแสงสูงสุดของแสงกระตุ้นและความยาวคลื่นการปล่อยแสงสูงสุดของฟลูออเรสเซนต์ค่อนข้างใกล้เคียงกัน ดังนั้นตัวกรองที่ใช้ในวิธีกระตุ้น BV จะต้องใช้ตัวกรองแบบตัดคม วิธีนี้สามารถใช้แสงสีน้ำเงินเป็นแสงกระตุ้นได้ ดังนั้นประสิทธิภาพการดูดซับของเม็ดสีฟลูออเรสเซนต์จึงสูงและได้ภาพที่สว่างกว่า ข้อเสียคือไม่สามารถมองเห็นแสงเรืองแสงที่ต่ำกว่า 500 นาโนเมตรได้ ในขณะที่แสงเรืองแสงที่สูงกว่า 500 นาโนเมตรจะทำให้ภาพทั้งหมดปรากฏเป็นสีเหลือง ในวิธีฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดี ความจำเพาะส่วนใหญ่จะถูกกำหนดโดยสีที่เป็นเอกลักษณ์ของเม็ดสีเรืองแสง ดังนั้น เมื่อพูดถึงความจำเพาะที่ละเอียดอ่อน ข้อเสียของวิธีการกระตุ้น BV ที่กล่าวถึงข้างต้นมักจะมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญ
