ความแตกต่างระหว่างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์และกล้องจุลทรรศน์ confocal
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
1. กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ใช้แสงอัลตราไวโอเลตเป็นแหล่งกำเนิดแสงเพื่อฉายรังสีวัตถุที่ถูกตรวจสอบทำให้มันปล่อยฟลูออเรสเซนต์จากนั้นสังเกตรูปร่างและตำแหน่งของวัตถุภายใต้กล้องจุลทรรศน์ กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ใช้เพื่อศึกษาการดูดซึมการขนส่งการกระจายและการแปลสารภายในเซลล์ สารบางชนิดในเซลล์เช่นคลอโรฟิลล์สามารถฟลูออเรสเซ่เมื่อสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต นอกจากนี้ยังมีสารบางอย่างที่ไม่สามารถปล่อยฟลูออเรสเซนต์ได้ แต่ยังสามารถปล่อยฟลูออเรสเซนต์ได้หากย้อมด้วยสีฟลูออเรสเซนต์หรือแอนติบอดีเรืองแสงและฉายรังสีด้วยแสงอัลตราไวโอเลต กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เป็นหนึ่งในเครื่องมือสำหรับการวิจัยเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณเกี่ยวกับสารดังกล่าว
2. หลักการของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์:
(a) แหล่งกำเนิดแสง: แหล่งกำเนิดแสงปล่อยแสงของความยาวคลื่นต่างๆ (จากอัลตราไวโอเลตถึงอินฟราเรด)
(b) แหล่งที่มาของตัวกรองการกระตุ้น: การส่งแสงของความยาวคลื่นเฉพาะที่สามารถทำให้เกิดฟลูออเรสเซนต์ในชิ้นงานในขณะที่ปิดกั้นแสงที่ไร้ประโยชน์สำหรับการเรืองแสงที่น่าตื่นเต้น
(c) ตัวอย่างฟลูออเรสเซนต์: มักจะเปื้อนด้วยเม็ดสีเรืองแสง
(d) การปิดกั้นตัวกรอง: มันเลือกส่งฟลูออเรสเซนต์โดยการปิดกั้นแสงกระตุ้นที่ไม่ได้รับการดูดซับโดยชิ้นงานและความยาวคลื่นบางอย่างในฟลูออเรสเซนต์ก็ถูกส่งผ่าน กล้องจุลทรรศน์ที่ใช้แสงอัลตราไวโอเลตเป็นแหล่งกำเนิดแสงเพื่อให้วัตถุที่ส่องสว่างปล่อยฟลูออเรสเซนต์ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนถูกประกอบเป็นครั้งแรกโดย Knorr และ Haruska ในกรุงเบอร์ลินประเทศเยอรมนีในปี 1931 กล้องจุลทรรศน์นี้ใช้คานอิเล็กตรอนความเร็วสูงแทนที่จะเป็นคานแสง เนื่องจากความยาวคลื่นที่สั้นกว่าของการไหลของอิเล็กตรอนเมื่อเทียบกับคลื่นแสงการขยายของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสามารถเข้าถึง 8 0 0000 เท่าโดยมีขีด จำกัด ความละเอียดต่ำสุด 0.2 นาโนเมตร กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบสแกนซึ่งใช้เป็นครั้งแรกในปี 1963 ช่วยให้ผู้คนเห็นโครงสร้างเล็ก ๆ บนพื้นผิวของวัตถุ
3. ขอบเขตแอปพลิเคชัน: ใช้เพื่อขยายภาพของวัตถุขนาดเล็ก โดยทั่วไปใช้สำหรับการสังเกตชีววิทยา, ยา, อนุภาคกล้องจุลทรรศน์ ฯลฯ
กล้องจุลทรรศน์ Confocal
1. กล้องจุลทรรศน์ confocal เพิ่มเลนส์ครึ่งสะท้อนแสงกึ่งไปยังเส้นทางแสงสะท้อนซึ่งเบี่ยงเบนแสงสะท้อนที่ผ่านเลนส์ไปในทิศทางอื่น ณ จุดโฟกัสมีแผ่นกั้นที่มีรูเข็มที่ตั้งอยู่ที่จุดโฟกัสและด้านหลังแผ่นกั้นเป็นท่อโฟโตมูลเทียร์ มันสามารถจินตนาการได้ว่าแสงสะท้อนก่อนและหลังการโฟกัสของแสงการตรวจจับไม่สามารถมุ่งเน้นไปที่รูเล็ก ๆ ผ่านระบบ confocal นี้และจะถูกบล็อกโดยแผ่นกั้น ดังนั้นเครื่องวัดแสงจึงวัดความเข้มแสงสะท้อนที่จุดโฟกัส
2. หลักการ: กล้องจุลทรรศน์ออปติคัลแบบดั้งเดิมใช้แหล่งกำเนิดแสงของสนามและภาพของแต่ละจุดบนชิ้นงานจะได้รับผลกระทบจากการเลี้ยวเบนหรือแสงที่กระจัดกระจายจากจุดใกล้เคียง กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลสแกนเลเซอร์ใช้ลำแสงเลเซอร์เพื่อส่องรูเข็มและสร้างแหล่งกำเนิดแสงจุดเพื่อสแกนทุกจุดบนระนาบโฟกัสของชิ้นงาน จุดส่องสว่างของชิ้นงานจะถูกถ่ายภาพที่รูเข็มของการตรวจจับและได้รับทีละจุดหรือเส้นโดยหลอดโฟโตมูลเทียร์ (PMT) หรืออุปกรณ์การเชื่อมต่อเย็น (CCCD) หลังจากตรวจจับรูเข็มอย่างรวดเร็ว รูพรุนการส่องสว่างและรูเข็มของการตรวจจับนั้นเชื่อมต่อกับระนาบโฟกัสของเลนส์วัตถุประสงค์ จุดบนระนาบโฟกัสจะมุ่งเน้นไปที่การส่องสว่างของรูพรุนและรูเข็มการปล่อยและจุดที่อยู่นอกระนาบโฟกัสจะไม่ถูกถ่ายภาพที่รูเข็มการตรวจจับ ภาพ confocal ที่เกิดขึ้นคือภาพตัดขวางของชิ้นงานตัวอย่างเอาชนะข้อเสียของภาพเบลอในกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป
