คุณรู้เกี่ยวกับกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์มากแค่ไหน
โดยทั่วไปแล้วกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์จะใช้หลอดปรอทความเข้มสูงเป็นแหล่งกำเนิดแสงกระตุ้น ฟิลเตอร์ใช้เพื่อกรองแสงที่ไม่ต้องการออก เหลือไว้แต่แสงบริสุทธิ์ที่มีความเข้มสูงเท่านั้นที่กระตุ้นฟลูออโรฟอร์ หลังจากที่แสงสีเดียวฉายรังสีตัวอย่างผ่านเลนส์ใกล้วัตถุ ตัวอย่างจะตื่นเต้นที่จะเปล่งแสง (ฟลูออเรสเซนซ์) และทั้งฟลูออเรสเซนต์และแสงกระตุ้นจะย้อนกลับมาตามเส้นทางออพติคอลของเลนส์ใกล้วัตถุ ในกรณีนี้จำเป็นต้องใช้กระจกไดโครอิกเพื่อกรองแสงกระตุ้น ปล่อยให้มีเพียงแสงฟลูออเรสเซนต์เท่านั้นที่เราต้องมองผ่าน
การเรืองแสงนี้มาถึงช่องมองภาพตามเส้นทางแสงของกล้องจุลทรรศน์ แล้วเข้าสู่ดวงตาของเรา ซึ่งเราสามารถมองเห็นการเรืองแสงที่ปล่อยออกมาจากฟลูออโรฟอร์
ตรวจสอบล่วงหน้าและปรับกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์:
(1) ก่อนการสังเกตการเรืองแสงแต่ละครั้ง จำเป็นต้องตรวจสอบการจัดแนวเส้นใย การโฟกัสเส้นทางแสง ไดอะแฟรมรูรับแสง และการตั้งค่าไดอะแฟรมฟิลด์ของอุปกรณ์เรืองแสงเป็นประจำ
(2) มีการติดตั้งชุดประกอบตัวกรองการกระตุ้น/การปล่อยสารเรืองแสงที่จำเป็นในตัวแปลงหรือไม่ มีการกำหนดค่าเลนส์ใกล้วัตถุของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์อย่างถูกต้องหรือไม่ และขจัดคราบน้ำมันและฝุ่นบนเลนส์ด้านหน้าของเลนส์ใกล้วัตถุ
(3) หากทำการสังเกตคอนทราสต์ของเฟสของแสงที่ส่องผ่านในเวลาเดียวกัน จำเป็นต้องตรวจสอบคอนจูเกตของจุดกึ่งกลางของคอนเดนเซอร์และวงแหวนคอนทราสต์ของเฟสที่อยู่ตรงข้ามกับเลนส์ใกล้วัตถุ
(4) ตรวจสอบว่าภาชนะบรรจุตัวอย่าง (กระจกสไลด์ กระจกครอบและอุปกรณ์อื่นๆ) ถูกปกคลุมด้วยของเหลวหรือฝุ่นหรือไม่ และความหนานั้นอยู่ภายในช่วงระยะการทำงานที่ปรับเทียบของเลนส์ใกล้วัตถุหรือไม่ ตัวอย่างที่หั่นไม่ควรหนาเกินไป ควรน้อยกว่าหรือเท่ากับ 10 μm
(5) เนื่องจากแหล่งกำเนิดแสงมีรังสีอัลตราไวโอเลต แผ่นป้องกันแสงสีน้ำตาลจึงถูกวางไว้เหนือด้านหน้าเวทีเพื่อป้องกันไม่ให้รังสีอัลตราไวโอเลตทำลายเรตินา
(6) ความไม่เสถียรของแรงดันไฟฟ้าจะลดอายุการใช้งานของหลอดปรอทแรงดันสูง และแหล่งจ่ายไฟของแหล่งกำเนิดแสงจะติดตั้งตัวปรับแรงดันไฟฟ้า
(7) เพื่อยืดอายุการใช้งานของหลอดปรอท สามารถปิดได้หลังจากเปิด 15 นาที เมื่อปิดไฟฟลูออเรสเซนต์ของหลอดปรอทแล้ว ต้องรออย่างน้อย 10 นาทีเพื่อรีสตาร์ทไอปรอทเพื่อให้เย็นลงและกลับสู่สถานะเดิม มิฉะนั้น อายุการใช้งานของหลอดจะได้รับผลกระทบ
การสังเกตภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง:
(1) ประมาณ 5-10 นาทีหลังจากเปิดแหล่งกำเนิดแสงฟลูออเรสเซนต์ ความเข้มของแสงกระตุ้นมักจะคงที่ และมีการโหลดตัวอย่างสำหรับการสังเกต เพื่อป้องกันการดับแสงเรืองแสงของตัวอย่างที่เกิดจากแสงกระตุ้นมากเกินไปในระหว่างกระบวนการโฟกัสและมองหาวัตถุ ขั้นแรกให้ซูมออกด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ ปรับแสงกระตุ้นให้มีความเข้มปานกลางด้วยไดอะแฟรมรูรับแสงหรือเพิ่มฟิลเตอร์ ND และ ย้ายระยะตัวอย่างอย่างสม่ำเสมอ หลังจากยืนยันภาพสะท้อนในกระจกแล้ว ให้ปรับไปที่สถานะเรืองแสงเพื่อถ่ายภาพและบันทึก
(2) การปรับคุณภาพของภาพที่ไม่ดี นอกจากปัจจัยในการเตรียมตัวอย่างแล้ว การปรับเปลี่ยนที่จำเป็นสามารถทำได้ ได้แก่:
① ไม่รวมอุปกรณ์ป้องกันแสงหรือจำกัดแสงในเส้นทางแสงของภาพ เช่น อุปกรณ์เสริม DIC, ฟิลเตอร์ ND เป็นต้น
②ปรับโฟกัสตัวรับและขนาดไดอะแฟรมรูรับแสงของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
③ ปรับวงแหวนแก้ไขความแตกต่างของการครอบคลุมของเลนส์ใกล้วัตถุของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์อย่างระมัดระวัง
จุดใช้งานของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ใช้การถ่ายภาพ "แอกทินิกฟลูออเรสเซนต์" หากความยาวคลื่นกระตุ้นที่เลือกอยู่ในพื้นที่ใกล้รังสีอัลตราไวโอเลต (320-400นาโนเมตร) ซึ่งมองไม่เห็นด้วยตาเปล่า สเปกตรัมการแผ่รังสีของการเรืองแสงจะสั้นกว่าความยาวคลื่นเฉลี่ยของแหล่งกำเนิดแสงแบบกระจกสะท้อนแสงธรรมดา ทำให้ดีขึ้น. โฟตอนพลังงานสูงชนกับอิเล็กตรอน ทำให้อิเล็กตรอนเปลี่ยนจากสถานะพื้นเป็นสถานะกระตุ้น อิเล็กตรอนในสถานะกระตุ้นจะไม่เสถียรมากและจะตกกลับสู่สถานะพื้น ในกระบวนการนี้ พลังงานความร้อนส่วนหนึ่งจะถูกใช้ไปและโฟตอนใหม่จะถูกปล่อยออกมา โฟตอนใหม่มีพลังงานต่ำกว่าโฟตอนเดิมและมีความยาวคลื่นยาวขึ้น เนื่องจากความยาวคลื่นโฟตอนใหม่แตกต่างจากความยาวคลื่นโฟตอนของแสงที่ตกกระทบ ลำแสงทั้งสองที่มีความยาวคลื่นต่างกันจึงถูกแยกออกจากกันด้วยวิธีการประมวลผลทางแสง ดังนั้นเราจะเห็นเฉพาะโฟตอนใหม่ที่ปล่อยออกมา (สัญญาณเรืองแสง) นั่นคือ กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงเห็นภาพเรืองแสง
