วิธีเลือกกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ที่เหมาะสม
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เป็นอุปกรณ์ถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์มาตรฐานในห้องปฏิบัติการและแผนกพยาธิวิทยาซึ่งใช้ลักษณะการเรืองแสงสำหรับการสังเกตและการถ่ายภาพ มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในสาขาต่าง ๆ เช่นชีววิทยาของเซลล์, ประสาทวิทยา, พฤกษศาสตร์, จุลชีววิทยา, พยาธิวิทยา, พันธุศาสตร์, ฯลฯ การถ่ายภาพเรืองแสงมีข้อดีของความไวและความจำเพาะสูงทำให้เหมาะสำหรับการสังเกตการกระจายตัวของโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง
การเลือกแหล่งกำเนิดแสงฟลูออเรสเซนต์
แหล่งกำเนิดแสงฟลูออเรสเซนต์ที่ใช้กันทั่วไปในปัจจุบัน ได้แก่ โคมไฟปรอทหลอดไฟโลหะเฮไลด์และแหล่งกำเนิดแสง LED ที่กำลังพัฒนาอย่างรวดเร็วในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา สเปกตรัมของแหล่งกำเนิดแสงฟลูออเรสเซนต์สามารถต่อเนื่องหรือไม่ต่อเนื่องและพลังงานแตกต่างกันไปในแถบต่าง ๆ แหล่งกำเนิดแสง LED จะค่อยๆกลายเป็นแหล่งกำเนิดแสงหลักสำหรับกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เนื่องจากแถบสเปกตรัมที่ค่อนข้างแคบการส่งออกพลังงานที่มีเสถียรภาพมากขึ้นอายุการใช้งานที่ยาวนานขึ้นและความปลอดภัยและความเป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมมากขึ้น
กล้องจุลทรรศน์ Confocal
ในการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบดั้งเดิมเนื่องจากการทับซ้อนกันของสารติดฉลากฟลูออเรสเซนต์และโครงสร้างการเรืองแสงที่เกิดขึ้นเอง อย่างไรก็ตามวัตถุประสงค์ของกล้องจุลทรรศน์ epifluorescence แบบดั้งเดิมไม่เพียง แต่รวบรวมแสงจากระนาบโฟกัส แต่ยังรวบรวมแสงที่กระจัดกระจายด้านบนและใต้ระนาบโฟกัสส่งผลให้ความละเอียดของภาพลดลงอย่างมาก
การถ่ายภาพ confocal จะตรวจจับส่วนของแสงที่สะท้อนจากระนาบโฟกัสเท่านั้นจึงแก้ปัญหาข้างต้น แหล่งกำเนิดแสงก่อตัวเป็นจุดเล็กและละเอียดบนระนาบโฟกัสผ่านรูเข็มและแสงที่ปล่อยออกมาจากระนาบโฟกัสจะถูกรวบรวมโดยเลนส์วัตถุประสงค์ ส่วนใหญ่ของฟลูออเรสเซนต์ที่ปล่อยออกมาจากจุดด้านบนหรือต่ำกว่าระนาบโฟกัสของเลนส์วัตถุประสงค์ไม่สามารถมาบรรจบกับรูเข็มได้ มีเพียงฟลูออเรสเซนต์ที่อยู่บนระนาบโฟกัสและส่วนเล็ก ๆ ของการเรืองแสงที่เกิดจากการ defocused เท่านั้นที่สามารถผ่านรูเข็มได้ในขณะที่ลำแสงแสงด้านนอกระนาบโฟกัสมาบรรจบกันที่ด้านหน้าหรือด้านหลังแผ่นพินโฮลและถูกบล็อกไม่ให้เข้าตรวจจับผ่านรูเข็ม ภาพที่ตรวจพบคือภาพจากระนาบโฟกัสดังนั้นคุณภาพของภาพสุดท้ายจึงได้รับการปรับปรุงอย่างมาก
เนื่องจากข้อดีและการใช้งานจริงของการสแกนด้วยกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลเลเซอร์กล้องจุลทรรศน์ confocal จึงเป็นผู้ช่วยทดลองที่ขาดไม่ได้ในสาขาชีววิทยาเซลล์ที่มีความแม่นยำสูงพฤกษศาสตร์และการวิจัยเซลล์ ในเวลาเดียวกันในศูนย์วิจัยทางวิทยาศาสตร์ในอนาคตมันจะเป็นเครื่องมือการวิจัยพื้นฐานและหลักที่สุด
