วิธีการทำสไลด์กล้องจุลทรรศน์
การทำสไลด์กล้องจุลทรรศน์มีสามวิธี:
1. วิธีการสเมียร์
วิธีสเมียร์เป็นวิธีการเตรียมโดยให้วัสดุกระจายอย่างสม่ำเสมอบนสไลด์
วัสดุสเมียร์ ได้แก่ สิ่งมีชีวิตเซลล์เดียว สาหร่ายขนาดเล็ก เลือด การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย เนื้อเยื่อหลวมของพืชและสัตว์ รังอสุจิ อับเรณู ฯลฯ
ควรให้ความสนใจเมื่อทา:
(1) สไลด์ต้องสะอาด
(2) สไลด์ควรจัดให้เรียบ
3) การเคลือบจะต้องสม่ำเสมอ ใช้หยดน้ำยาเคลือบทางด้านขวาของกึ่งกลางสไลด์แล้วเกลี่ยให้ทั่วด้วยใบมีดผ่าหรือไม้จิ้มฟัน ฯลฯ
4) การเคลือบควรมีความบาง ใช้สไลด์อื่นเป็นตัวดัน ค่อยๆ ดันจากขวาไปซ้ายไปตามพื้นผิวของสไลด์โดยหยดสารละลายลงไป (มุมระหว่างสไลด์ทั้งสองควรอยู่ที่ 30 องศา ถึง 45 องศา ) แล้วทาเป็นชั้นบางๆ สม่ำเสมอ
5) การตรึง หากจำเป็นต้องทำการตรึง ให้ใช้การตรึงด้วยสารเคมีหรือการผึ่งให้แห้ง (แบคทีเรีย)
6) การย้อมสี ใช้เมทิลีนบลูกับแบคทีเรียและใช้คราบราเชลกับเลือด น้ำยาย้อมสีควรครอบคลุมพื้นผิวที่เคลือบทั้งหมด
7) ล้าง. ดูดซับบนกระดาษดูดซับหรืออบให้แห้ง
8) ปิดผนึกฟิล์ม หากต้องการจัดเก็บระยะยาว ให้ใช้ฟิล์มต้นไม้แคนาดา
2. วิธีการกดฟิล์ม
วิธีฟิล์มดันเป็นวัสดุชีวภาพที่วางอยู่ระหว่างสไลด์และแผ่นปิด โดยใช้แรงกดที่แน่นอน เซลล์เนื้อเยื่อจะถูกกดออกจากกันเป็นวิธีการเตรียมการ
(1) นำวัสดุไป การสังเกตการแบ่งเซลล์ ควรเลือกเซลล์เนื้อเยื่อสดที่อุดมสมบูรณ์เป็นวัสดุ เช่น ปลายราก เนื้อเยื่อเจริญส่วนปลายก้าน เซลล์ไขกระดูก อับเรณู (เซลล์แม่เกสรดอกไม้) รังอสุจิ (spermatogonia) เป็นต้น
(2) การตรึง การตรึงวัสดุสามารถกำหนดได้ตามความต้องการ ทันทีหลังจากสังเกตฟิล์มความดันวัสดุ ไม่สามารถทำการรักษาแบบคงที่แยกต่างหาก (และการย้อมสีแบบซิงโครนัส) ใช้วัสดุไม่ได้ทันทีหลังจากการตรวจสอบ วัสดุสามารถแก้ไขได้ด้วยการตรึง (โดยทั่วไปด้วยแอลกอฮอล์อะซิเตตตรึง) คงที่ 2 ~ 24 ชั่วโมง (ขึ้นอยู่กับวัสดุ) หลังจากล้างด้วยเอทานอล 95% เก็บรักษาไว้ในเอทานอล 70% สแตนด์บาย
(3) การแยกตัวออกจากกัน เซลล์ไม่ง่ายที่จะแยกย้ายวัสดุด้วยสารละลายแยกไฮโดรไลซิส (เช่น 1N HCl หรือกรดไฮโดรคลอริกและสารละลายแอลกอฮอล์) การบำบัดทั่วไป 6 ~ 20 นาทีหลังจากแยกตัวออกและล้างด้วยน้ำก่อนย้อมสี
(4) การย้อมสี คราบมีหลายประเภท การสังเกตโครโมโซมมักใช้ในการย้อมด้วยสารละลายย้อมสีสีม่วงแดงอะซิเตท
(5) การกดฟิล์ม วางวัสดุบนสไลด์ เติมน้ำหรือน้ำยาย้อมสี คลุมสลิปปิดไว้ และค่อยๆ กดสไลด์ด้วยนิ้วหัวแม่มือของคุณ
(6) การสังเกต หลังจากกดฟิล์มแล้วก็สามารถสังเกตได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์
