ห้องเรียนการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์丨กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบไวด์ฟิลด์
ในการใช้งานการถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิต กล้องจุลทรรศน์ไวด์ฟิลด์ฟลูออเรสเซนซ์ช่วยอำนวยความสะดวกในการสังเกตไดนามิกของเซลล์สานุศิษย์ที่เติบโตในห้องสิ่งแวดล้อมเฉพาะที่วางอยู่บนเวทีกล้องจุลทรรศน์ ในการกำหนดค่าพื้นฐานที่สุด กล้องจุลทรรศน์เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อกลับหัวแบบมาตรฐานที่ติดตั้งไฟเรืองแสง EPI จะทำงานควบคู่กับระบบตรวจจับแบบ Area Array (ปกติคือกล้อง CCD) ฟิลเตอร์เรืองแสงที่เหมาะสม และระบบชัตเตอร์เพื่อจำกัดการเปิดรับเซลล์มากเกินไปต่อแสงกระตุ้นที่เป็นอันตราย . กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์พื้นฐานอาศัยตัวกรองสัญญาณรบกวนที่จับคู่อย่างระมัดระวังเพื่อเลือกแบนด์วิธเฉพาะสำหรับการส่องสว่างและการตรวจจับแสงที่ปล่อยออกมา แหล่งกำเนิดแสงประกอบด้วยหลอดอาร์คปรอท ซีนอน และเมทัลฮาไลด์ ระบบเลเซอร์ขยายลำแสง และไดโอดเปล่งแสง (LED) ซึ่งทั้งหมดนี้ต้องการข้อมูลจำเพาะของตัวกรองที่แตกต่างกัน ฟลูออโรฟอร์สังเคราะห์ที่ใช้ในกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์มีสเปกตรัมการแผ่รังสีครอบคลุมบริเวณใกล้รังสีอัลตราไวโอเลต มองเห็นได้ และใกล้อินฟราเรด การใช้โปรตีนเรืองแสงที่เข้ารหัสทางพันธุกรรมได้ขยายขีดความสามารถของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ในการถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิตอย่างมาก ทำให้นักวิจัยสามารถกำหนดเป้าหมายบริเวณเซลล์ย่อยที่สนใจได้อย่างแม่นยำ
Nuohai LS 18 กล้องจุลทรรศน์แบบแผ่นแสงชนิดใหม่ที่พัฒนาโดย Nuohai ได้รับการออกแบบมาเป็นพิเศษสำหรับการถ่ายภาพ 3 มิติความละเอียดสูงของตัวอย่างเนื้อเยื่อโปร่งใสขนาดใหญ่ และอุทิศตนเพื่อการสำรวจเนื้อเยื่อต่างๆ ที่ไม่บุบสลาย เช่น สมอง ม้าม ลำไส้เล็ก ไต ปอด หัวใจ และเนื้องอก โครงสร้างอวัยวะ 3 มิติที่แม่นยำ
ในการเรืองแสงแบบไวด์ฟิลด์ การปล่อยแสงแบบเต็มรูรับแสงที่รวบรวมโดยวัตถุประสงค์ของกล้องจุลทรรศน์จะเพิ่มสัญญาณที่บันทึกไว้ให้สูงสุดในขณะที่ลดเวลาเปิดรับแสงที่จำเป็นให้เหลือน้อยที่สุด ดังนั้นจึงสามารถถ่ายภาพตัวอย่างในช่วงเวลาแสงที่สั้นมากได้ ข้อเสียเปรียบหลักของการถ่ายภาพมุมกว้างคือการเรืองแสงจากบริเวณที่ห่างไกลจากระนาบโฟกัส เช่นเดียวกับสัญญาณพื้นหลัง เป็นแสงที่ไม่ต้องการซึ่งมักบดบังคุณลักษณะที่น่าสนใจ ดังนั้น การถ่ายภาพไวด์ฟิลด์จะให้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดเมื่อลักษณะที่น่าสนใจมีขนาดใหญ่ (เช่น ออร์แกเนลล์) หรือมีจุดบกพร่องในธรรมชาติสูง ตัวอย่างเซลล์ที่มีชีวิตที่หลากหลาย รวมถึงเซลล์สานุศิษย์ แบคทีเรีย ยีสต์ และเนื้อเยื่อที่บางมาก เป็นตัวเลือกที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการถ่ายภาพด้วยแสงฟลูออเรสเซนต์แบบไวด์ฟิลด์ อย่างไรก็ตาม เนื้อเยื่อที่หนากว่า (มากกว่า 5 ไมครอน) ควรใช้ด้วยวิธีการถ่ายภาพขั้นสูงกว่า
แม้ว่าจะมีความก้าวหน้ามากมายในการถ่ายภาพด้วยแสงฟลูออเรสเซนต์ด้วยสีย้อมเรืองแสงสังเคราะห์ จุดควอนตัม และโปรตีนเรืองแสง ในบางกรณี การรวมแสงฟลูออเรสเซนต์เข้ากับรูปแบบการสร้างภาพอื่นๆ จะเป็นประโยชน์ ตัวอย่างเช่น สามารถใช้ DIC ร่วมกับการเรืองแสงแบบไวด์ฟิลด์เพื่อตรวจสอบความมีชีวิตของเซลล์และสัณฐานวิทยาทั่วไป ในขณะที่ศึกษาปรากฏการณ์ที่น่าสนใจสำหรับเป้าหมายที่ติดฉลากเฉพาะ การรับ DIC และฟลูออเรสเซนซ์ในภาพเดียวมักไม่สามารถทำได้ แต่ในกล้องจุลทรรศน์ที่กำหนดค่าอย่างเหมาะสม เทคนิคทั้งสองสามารถใช้ตามลำดับได้ ดังนั้น หลังจากถ่ายภาพในโหมดอีพิฟลูออเรสเซนซ์แล้ว ภาพ DIC สามารถได้รับจากตัวอย่างที่มีฉลากเรืองแสงโดยใช้แสงส่องผ่าน สามารถผสานสองภาพระหว่างการวิเคราะห์ภายหลังได้ การได้รับ DIC และภาพเรืองแสงพร้อมกันเป็นไปได้ในการกำหนดค่ากล้องจุลทรรศน์แบบไวด์ฟิลด์ขั้นสูงโดยใช้การส่องสว่างที่แยกจากสเปกตรัม (เช่น อินฟราเรดที่มองเห็นและอินฟราเรดใกล้) และอะแดปเตอร์กล้องคู่หรือกล้องแยกมุมมอง ในกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลสแกนด้วยเลเซอร์ส่วนใหญ่ สามารถรับภาพได้ทั้งในโหมดฟลูออเรสเซนซ์และโหมด DIC พร้อมกัน ทำให้ไม่มีความจำเป็นในการประมวลผลภายหลังการได้มา คอนทราสต์ของเฟสและความเปรียบต่างของการมอดูเลตของฮอฟฟ์แมนยังสามารถใช้ร่วมกับกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แบบไวด์ฟิลด์ อย่างไรก็ตาม ในเทคนิคเหล่านี้ เลนส์ใกล้วัตถุเป็นแบบพิเศษ ไม่ว่าจะเป็นเฟสริงหรือจานมอดูเลตของฮอฟฟ์แมน ก็จะทำให้สูญเสียความเข้มของการปล่อยก๊าซ 5-15 เปอร์เซ็นต์
ลิงก์บทความ: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
