เครื่องวัดค่า pH - การหาค่าและการปรับค่า pH ปานกลาง
จุลินทรีย์ทั้งหมดได้รับผลกระทบจากค่า pH ของสิ่งแวดล้อมที่พวกมันอาศัยอยู่ บ่อยครั้ง การมีอยู่ของสายพันธุ์ที่เลือกทำให้ช่วงค่า pH ที่พวกมันเติบโตแคบลง บางครั้งความเป็นกรดหรือด่างของอาหารยังสามารถทำหน้าที่เป็นปัจจัยคัดเลือกการเจริญเติบโต อย่างไรก็ตาม สำหรับสื่อการทดสอบทางชีวเคมี ช่วงค่า pH ที่จุลินทรีย์แสดงกิจกรรม tk ในสารตั้งต้นนั้นแคบกว่าช่วงค่า pH ที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโต ดังนั้น จึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องปรับค่า pH ของสื่อให้อยู่ในช่วงที่คาดไว้ เมื่อห้องปฏิบัติการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อตามองค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ จะต้องตรวจสอบและปรับค่า pH ต้องชี้ให้เห็นว่าแม้กระทั่งสำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อสังเคราะห์สำเร็จรูปที่ขาดน้ำที่ผู้ผลิตจัดหาให้ (โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำในสต็อกบางชนิด) จำเป็นต้องวัดค่า pH สุดท้ายหลังจากสร้างสื่อทดลอง
วิธีที่แม่นยำที่สุดในการวัดค่า pH ของตัวกลางคือการใช้เครื่องวัดค่า pH ก่อนใช้งาน ต้องสอบเทียบด้วยสารละลายบัฟเฟอร์มาตรฐานที่ทราบค่า pH (ปกติ pH จะอยู่ที่ 4 ถึง 7) ล้างอิเล็กโทรดของเครื่องวัดค่า pH ด้วยน้ำกลั่นและจุ่มลงในอาหารเลี้ยงเชื้อในบีกเกอร์ จากนั้นอ่านค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อจากสเกลของเครื่องวัดค่า pH ผู้ผลิตแต่ละรายจะให้คำแนะนำการใช้งานโดยละเอียดสำหรับเครื่องวัดค่า pH แต่ละประเภท
เมื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ สามารถปรับค่า pH ได้อย่างง่ายดายโดยใช้เครื่องวัดค่า pH พร้อมการกวนเชิงกล ควรเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ในภาชนะ (เช่น บีกเกอร์ขนาดใหญ่) ที่สามารถคนอย่างต่อเนื่องได้ หรือแม่เหล็กที่ห่อด้วยเทฟล่อน ค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีวุ้นจำเป็นต้องปรับหลังจากการละลาย ซึ่งทำได้ง่ายด้วยเครื่องกวนแม่เหล็กที่ให้ความร้อนได้ เมื่อปรับค่า pH ให้ใช้สารละลายบัฟเฟอร์มาตรฐานที่ทราบค่า pH เพื่อสอบเทียบเครื่องวัดค่า pH ก่อน จากนั้นใส่อิเล็กโทรดคอมโพสิตและเทอร์โมมิเตอร์แบบต้านทาน (ถ้ามี) ลงในสื่อ ค่อยๆ เติมกรดไฮโดรคลอริกและโซเดียมไฮดรอกไซด์ในปริมาณที่เหมาะสมจากปลายบีกเกอร์ห่างจากอิเล็กโทรด เพื่อให้สื่อสามารถเข้าถึงและรักษาค่า pH ที่ต้องการได้
การชดเชยอุณหภูมิของเครื่องวัดค่า pH ควรคำนึงถึงผลกระทบของอุณหภูมิที่มีต่อระบบอิเล็กโทรด: ในการเจือจางและตัวกลางบางอย่าง ค่า pH จะเปลี่ยนแปลงอย่างมากตามอุณหภูมิ สำหรับตัวกลางที่เป็นของเหลวและการเจือจาง โดยปกติค่า pH สามารถปรับและวัดได้ที่ 25 องศาหรือที่อุณหภูมิที่ใช้
ต้องปรับค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจากละลายน้ำ และอุณหภูมิของการละลายสูงกว่า 45 องศา : ดังนั้น ควรหาค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของแข็งที่อุณหภูมิใช้งาน ในเวลานี้ ควรใช้อิเล็กโทรดคอมโพสิตหัวแบน และควรปรับเทียบการชดเชยอุณหภูมิของเครื่องวัดค่า pH ด้วยตนเอง เมื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ หากพบว่าค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อแตกต่างกันระหว่างสถานะหลอมเหลวและสถานะแข็งตัว แสดงว่ามีข้อผิดพลาดในการปรับค่า pH
ในทำนองเดียวกัน เมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมไว้ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความร้อน (เช่น หม้อนึ่งฆ่าเชื้อ) อาจมีการเปลี่ยนแปลงค่า pH ได้เช่นกัน สำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำ ผู้ผลิตได้คำนึงถึงเรื่องนี้ และโดยปกติแล้วไม่จำเป็นต้องปรับค่า pH แต่ควรตรวจสอบค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อที่จะใช้อย่างระมัดระวัง หากต้องปรับค่า pH ของวุ้นที่ขาดน้ำระหว่างการละลายซ้ำหรือการเตรียม วิธีที่ดีที่สุดคือปรับด้วยกรดไฮโดรคลอริกที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยตัวกรองและสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์หลังจากขั้นตอนการฆ่าเชื้อเพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้เกิดความร้อนสูงเกินไปในตัวกลาง เมื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วยวัตถุดิบหรือยาที่แตกต่างกัน ต้องตรวจสอบค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อหลังการนึ่งฆ่าเชื้อ นอกจากนี้ หากพบว่าค่า pH ของตัวกลางเปลี่ยนไปไม่เหมือนเดิมหลังจากหม้อนึ่งฆ่าเชื้อแต่ละครั้ง จะสามารถปรับค่า pH ได้อย่างเหมาะสมเมื่อเตรียมตัวกลาง อย่างไรก็ตาม ยังคงจำเป็นต้องหาค่า pH สุดท้ายของอาหารเลี้ยงเชื้อหลังการฆ่าเชื้อ
