การเตรียมและการสังเกตตัวอย่างทางชีววิทยาสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ขึ้นอยู่กับความยาวคลื่นของแสงที่ใช้ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน เริ่มปรากฏให้เห็นในปี พ.ศ. 2476 เนื่องมาจากการใช้ความยาวคลื่นที่สั้นกว่าแสงที่มองเห็นได้จากลำอิเล็กตรอนเป็นแหล่งกำเนิดแสง ดังนั้น ความละเอียดจึงได้ สามารถบรรลุผลดีกว่ากล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงดีขึ้นอย่างมาก แหล่งกำเนิดแสงที่แตกต่างกันยังกำหนดชุดของความแตกต่างระหว่างกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนและกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
ตามความแตกต่างหลักการถ่ายภาพของลำอิเล็กตรอนและบทบาทของตัวอย่างในรูปแบบต่างๆ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสมัยใหม่จึงได้รับการพัฒนาให้มีรูปแบบได้หลายประเภท ปัจจุบัน *ที่นิยมใช้กันทั่วไปคือ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน และอิเล็กตรอนแบบส่องกราด กล้องจุลทรรศน์ แบบแรกสามารถอยู่ในช่วง 1,000-1,000,000 เท่าของกำลังขยายรวมของช่วงการเปลี่ยนแปลง ส่วนแบบหลังสามารถอยู่ในกำลังขยายรวมของ { {4}},000 เท่าของกำลังขยายรวมของการเปลี่ยนแปลงระหว่าง การทดลองนี้เน้นการเตรียมตัวอย่างสำหรับกล้องจุลทรรศน์สองประเภท ได้แก่ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด
วัสดุ
1. สายพันธุ์ Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) เอียง
2. สารละลายหรือรีเอเจนต์ อะมิลอะซิเตต, กรดซัลฟิวริกเข้มข้น, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากเชื้อ, กรดโซเดียมฟอสโฟตุงสติก 2% (pH 6.5-8.0) สารละลายที่เป็นน้ำ, 0.3% สารละลายโพลีไวนิลฟอร์มาลดีไฮด์ (ละลายในไตรคลอโรมีเทน), ไซโตโครม c, แอมโมเนียมอะซิเตต, พลาสมิด pBR322
3. เครื่องมือหรืออุปกรณ์อื่นๆ กล้องจุลทรรศน์แบบธรรมดา ตาข่ายทองแดง กรวยพอร์ซเลน บีกเกอร์ จานแบน บิวเรตต์ปลอดเชื้อ แหนบปลอดเชื้อ มีดหมอ สไลด์ ** จานนับ เครื่องเคลือบสุญญากาศ เครื่องอบแห้งจุดวิกฤติ และอื่นๆ
ขั้นตอนการดำเนินงาน
(I) การเตรียมตัวอย่างและการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน
1. การรักษาตาข่ายโลหะ
ตัวอย่างกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงจะถูกวางบนสไลด์เพื่อการสังเกต อย่างไรก็ตาม ในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน เนื่องจากอิเล็กตรอนไม่สามารถเจาะแผ่นกระจกได้ จึงมีเพียงวัสดุตาข่ายเท่านั้นที่สามารถใช้เป็นพาหะได้ โดยทั่วไปเรียกว่าตาข่ายพาหะ ตาข่ายพาหะสามารถแบ่งออกได้เป็นข้อกำหนดต่างๆ มากมายเนื่องจากวัสดุและรูปร่างที่แตกต่างกัน ซึ่ง * ที่ใช้กันทั่วไปคือตาข่ายทองแดง 200-400 ตาข่าย (จำนวนรู) ควรทำความสะอาดตาข่ายทองแดงก่อนใช้งานเพื่อขจัดสิ่งสกปรกและรักษาความสะอาด มิฉะนั้นจะส่งผลต่อคุณภาพของฟิล์มรองรับและความชัดเจนของภาพถ่ายชิ้นงานทดสอบ ตาข่ายทองแดงที่ใช้ในการทดลองนี้คือ 400 ตาข่าย ซึ่งสามารถบำบัดได้ด้วยวิธีต่อไปนี้ ขั้นแรก ให้ฟอกด้วยอะมิลอะซิเตตสักสองสามชั่วโมง จากนั้นล้างออกด้วยน้ำกลั่นหลายๆ ครั้ง จากนั้นจึงฟอกด้วยเอทานอลแบบแอนไฮดรัส การคายน้ำ หากตาข่ายทองแดงโดยวิธีข้างต้นยังไม่สะอาด สามารถใช้เจือจางกรดซัลฟิวริกเข้มข้น (1:1) แช่ใน 1 ~ 2 นาที หรือต้มในสารละลาย NaOH 1% เป็นเวลาหลายนาที แล้วล้างหลายครั้งด้วยน้ำกลั่น วางไว้ในการคายน้ำเอธานอลแบบไม่มีน้ำเพื่อใช้
2. การเตรียมฟิล์มรอง
ในการสังเกตตัวอย่าง ในเครือข่ายผู้ให้บริการควรถูกปกคลุมด้วยชั้นของฟิล์มที่ไม่มีโครงสร้างและสม่ำเสมอ มิฉะนั้นตัวอย่างขนาดเล็กจะรั่วไหลออกมาจากรูในเครือข่ายผู้ให้บริการ ฟิล์มชั้นนี้มักจะเรียกว่าฟิล์มรองรับหรือฟิล์มพาหะ ฟิล์มรองรับควรมีความโปร่งใสต่ออิเล็กตรอน และโดยทั่วไปความหนาควรน้อยกว่า 20 นาโนเมตร ภายใต้ผลกระทบของลำแสงอิเล็กตรอน ฟิล์มควรมีความแข็งแรงทางกลในระดับหนึ่ง สามารถรักษาเสถียรภาพของโครงสร้าง และมีการนำความร้อนที่ดี นอกจากนี้ เครือข่ายรองรับไม่ควรมีโครงสร้างที่มองเห็นได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน และไม่มีปฏิกิริยาทางเคมีกับตัวอย่างที่บรรทุก และไม่รบกวนการสังเกตตัวอย่าง และโดยทั่วไปความหนาจะอยู่ที่ประมาณ 15 นาโนเมตร ฟิล์มรองรับสามารถทำจากฟิล์มพลาสติก (เช่น ฟิล์มฝ้ายกันไฟ ฟิล์มโพลีเอทิลีนฟอร์มาลดีไฮด์ ฯลฯ) ฟิล์มคาร์บอน หรือฟิล์มโลหะ (เช่น ฟิล์มเบริลเลียม เป็นต้น) ภายใต้สภาพการทำงานตามปกติ ความต้องการสามารถทำได้ด้วยฟิล์มพลาสติก ในขณะที่การเตรียมฟิล์มพลาสติกในฟิล์มกาวฝ้ายไฟนั้นค่อนข้างง่าย แต่ความแข็งแรงไม่แข็งแรงเท่ากับฟิล์มโพลีเอทิลีนฟอร์มาลดีไฮด์
