หมายเหตุและคำแนะนำหลายประการสำหรับการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบคอนทราสต์เฟส
การใช้กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
1) ติดตั้งอุปกรณ์คอนทราสต์ของเฟส: ถอดเลนส์คอนเดนเซอร์ของกล้องจุลทรรศน์ธรรมดา และติดตั้งเลนส์คอนเดนเซอร์พร้อมไดอะแฟรมรูปวงแหวนบนกล้องจุลทรรศน์ที่ตรงกัน ถอดเลนส์ใกล้วัตถุธรรมดาของกล้องจุลทรรศน์ออก และแทนที่ด้วยเลนส์ใกล้วัตถุที่มีแผ่นเฟส เปลี่ยนเลนส์ใกล้ตาด้วยเลนส์ใกล้ตาโฟกัสสำหรับกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส ฟิลเตอร์สีเขียวพิเศษ (บางครั้งไม่จำเป็น) ถูกวางไว้ที่ทางเข้าแสงของแหล่งกำเนิดแสง
2) การจัดตำแหน่งแสงและโฟกัส: ปรับเลนส์ใกล้ตาเพื่อโฟกัสและสกรูปรับความหนาจนมองเห็นวงกลมสีขาวและวงกลมสีดำได้ชัดเจนในมุมมองภาพ วงกลมสีดำได้รับการแก้ไขแล้วและสามารถเคลื่อนย้ายวงกลมสีขาวได้โดยการปรับสกรูบนอุปกรณ์คอนเดนเซอร์ เพื่อให้วงกลมสีดำและวงกลมสีขาวตรงกันอย่างสมบูรณ์ ถอดเลนส์ใกล้ตาออกและแทนที่ด้วยเลนส์ใกล้ตาเดิมของกล้องจุลทรรศน์เพื่อตรวจสอบ
การวิเคราะห์ปัญหาการใช้กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
1. อิทธิพลของความหนาของตัวอย่าง เมื่อทำการสังเกตเฟสคอนทราสต์ ความหนาของตัวอย่างควรเป็น 5 ไมโครเมตรหรือบางกว่า เมื่อใช้ตัวอย่างที่หนาขึ้น ชั้นบนของตัวอย่างจะชัดเจนมาก แต่ชั้นลึกจะเบลอและทำให้เกิดการรบกวนการเลื่อนเฟส และการกระเจิงของแสง
2. อิทธิพลของกระจกครอบและกระจกสไลด์ ตัวอย่างจะต้องถูกครอบด้วยกระจกครอบ มิฉะนั้น วงแหวนสว่างของไดอะแฟรมรูปวงแหวนและวงแหวนสีเข้มของแผ่นเฟสจะซ้อนทับกันได้ยาก การสังเกตคอนทราสต์ของเฟสยังมีความต้องการสูงในด้านคุณภาพกระจกของกระจกสไลด์และกระจกครอบ เมื่อมีรอยขีดข่วน ความหนาไม่สม่ำเสมอหรือไม่สม่ำเสมอ จะเกิดความผิดเพี้ยนของวงแหวนสว่างและการรบกวนเฟส นอกจากนี้ เมื่อสไลด์หนาหรือบางเกินไป วงแหวนสว่างของไดอะแฟรมรูปวงแหวนจะใหญ่ขึ้นหรือเล็กลง
3. เอฟเฟกต์รัศมีและสีซีดจาง ในกระบวนการถ่ายภาพของกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส เมื่อโครงสร้างบางอย่างมืดลงเนื่องจากเฟสดีเลย์ จะไม่สูญเสียแสง แต่เป็นผลจากการกระจายแสงซ้ำบนระนาบภาพ ดังนั้นแสงที่หายไปในพื้นที่มืดจะปรากฏเป็นรัศมีสว่างรอบๆ วัตถุที่มืดกว่า นี่เป็นข้อเสียของกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส ซึ่งขัดขวางการสังเกตโครงสร้างละเอียด และปรากฏการณ์ฮาโลจะร้ายแรงกว่าเมื่อไดอะแฟรมรูปวงแหวนแคบมาก ปรากฏการณ์อื่นในกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสคือเอฟเฟกต์การแรเงา ซึ่งหมายถึงการสูญเสียคอนทราสต์ที่ขอบของพื้นที่ขนาดใหญ่ที่มีเฟสดีเลย์เท่ากันเมื่อสังเกตจากเฟสคอนทราสต์
4. การกลับเฟส เมื่อ n'n ความเปรียบต่างของแสงและความมืดของภาพจะอยู่ตรงข้ามกัน ซึ่งเรียกว่าการกลับเฟส ไม่สามารถจดจำได้เมื่อความแตกต่างของเฟส δ=0 และความเปรียบต่างจะมากขึ้นเมื่อการเพิ่มขึ้นของ δ และการผกผันของเฟสจะปรากฏขึ้นเมื่อ δ ยังคงเพิ่มขึ้นจนถึงค่าหนึ่งๆ เมื่อใช้เลนส์ใกล้วัตถุที่มีค่าการดูดกลืนแสงสูง 90 เปอร์เซ็นต์ ค่าการแปลงนี้จะอยู่ที่ประมาณ 0.55λ และเมื่อใช้เลนส์ใกล้วัตถุที่มีค่าการดูดกลืนแสงมาตรฐาน 70 เปอร์เซ็นต์ จะอยู่ที่ประมาณ 0.33λ . ควรใช้วัตถุประสงค์ที่มีค่าการดูดกลืนแสงสูงเพื่อแก้ไขความแตกต่างของเส้นทางแสงที่น้อยลง
