กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์มีสองประเภทตามเส้นทางแสง
1. กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบส่องผ่าน: แหล่งกำเนิดแสงกระตุ้นจะผ่านวัสดุตัวอย่างผ่านคอนเดนเซอร์เพื่อกระตุ้นการเรืองแสง โดยทั่วไปจะใช้ตัวสะสมสนามมืด หรือตัวสะสมแบบธรรมดาก็ได้ และตัวสะท้อนแสงจะถูกปรับเพื่อเปลี่ยนทิศทางและกระจายแสงกระตุ้นไปยังชิ้นงานทดสอบ นี่คือกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์รุ่นเก่า ข้อดีก็คือ แสงเรืองแสงจะแรงเมื่อใช้กำลังขยายต่ำ แต่ข้อเสียคือ แสงเรืองแสงจะอ่อนลงเมื่อกำลังขยายเพิ่มขึ้น ดังนั้นจึงควรสังเกตวัสดุตัวอย่างที่มีขนาดใหญ่กว่า
2. กล้องจุลทรรศน์อีพิฟลูออเรสเซนซ์เป็นกล้องจุลทรรศน์ชนิดเรืองแสงชนิดใหม่ที่พัฒนาขึ้นในยุคปัจจุบัน ความแตกต่างจากข้างต้นคือแสงกระตุ้นตกลงจากเลนส์ใกล้วัตถุถึงพื้นผิวชิ้นงานทดสอบ กล่าวคือ เลนส์ใกล้วัตถุตัวเดียวกันนั้นถูกใช้เป็นคอนเดนเซอร์ส่องสว่างและเลนส์ใกล้วัตถุสำหรับรวบรวมแสงฟลูออเรสเซนต์ จำเป็นต้องเพิ่มตัวแยกลำแสงสองสีในเส้นทางแสง ซึ่งเท่ากับ 45% ของยูเรเนียมเชิงแสง มุม แสงกระตุ้นจะสะท้อนเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุและมุ่งไปที่ตัวอย่าง แสงเรืองแสงที่สร้างโดยตัวอย่างและแสงกระตุ้นที่สะท้อนโดยพื้นผิวเลนส์ใกล้วัตถุและพื้นผิวกระจกฝาครอบเข้าสู่เลนส์ใกล้วัตถุในเวลาเดียวกันและกลับไปที่ตัวแยกลำแสงไดโครมาติก เพื่อให้แสงกระตุ้นแยกออกจากเรืองแสง การกระตุ้นที่เหลือ แสงจะถูกดูดซับโดยตัวกรองที่ปิดกั้น หากคุณใช้ตัวกรองแบบกระตุ้น/ตัวแยกลำแสงสองสี/ตัวกรองแบบบล็อกที่แตกต่างกัน คุณจะสามารถตอบสนองความต้องการของผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาเรืองแสงต่างๆ ได้ ข้อดีของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ประเภทนี้คือ ช่องมองภาพได้รับแสงสว่างสม่ำเสมอ ภาพมีความชัดเจน และยิ่งกำลังขยายมากเท่าใด แสงฟลูออเรสเซนต์ก็จะยิ่งแข็งแกร่งขึ้นเท่านั้น
(2) วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์
1. เปิดแหล่งกำเนิดแสง และหลอดปรอทความดันสูงพิเศษจะต้องอุ่นเครื่องเป็นเวลาหลายนาทีจึงจะถึงจุดที่สว่างที่สุด
2. กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบส่องผ่านจำเป็นต้องมีการติดตั้งตัวกรองการกระตุ้นที่จำเป็นระหว่างแหล่งกำเนิดแสงและคอนเดนเซอร์ และจะต้องติดตั้งตัวกรองการปิดกั้นที่เกี่ยวข้องด้านหลังเลนส์ใกล้วัตถุ กล้องจุลทรรศน์อีพิฟลูออเรสเซนซ์จำเป็นต้องใส่ฟิลเตอร์กระตุ้น/ตัวแยกลำแสงสองสี/ฟิลเตอร์บล็อคที่จำเป็นเข้าไปในช่องของเส้นทางแสง
3. ใช้กล้องจุลทรรศน์กำลังขยายต่ำในการสังเกต และปรับศูนย์กลางของแหล่งกำเนิดแสงตามอุปกรณ์ปรับแต่งของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์รุ่นต่างๆ เพื่อให้อยู่ตรงกลางจุดส่องสว่างทั้งหมด
4. วางชิ้นงานทดสอบและปรับโฟกัสเพื่อสังเกต โปรดให้ความสนใจระหว่างการใช้งาน: อย่าสังเกตตัวกรองด้วยตาโดยตรงเพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหายต่อดวงตา เมื่อสังเกตชิ้นงานด้วยเลนส์น้ำมัน คุณต้องใช้เลนส์น้ำมันชนิดพิเศษที่ไม่เรืองแสง หลอดไฟปรอทแรงดันสูงไม่สามารถเปิดใหม่ได้ทันทีหลังจากปิดแล้ว สามารถสตาร์ทใหม่ได้อีกครั้งหลังจากผ่านไป 5 นาที มิฉะนั้นจะไม่เสถียรและส่งผลต่ออายุการใช้งานของหลอดปรอท
(3) สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์บนแท่นสอนโดยใช้ตัวกรองแสงสีน้ำเงินม่วง จะเห็นได้ว่าเนื้อเรื่องคือ o ในเซลล์ที่ย้อมด้วยสีเรืองแสงสีส้มอะคริดีน 01% นิวเคลียสและไซโตพลาสซึมจะตื่นเต้นที่จะผลิตสีเรืองแสงสองสีที่แตกต่างกัน (สีเขียวเข้มและสีส้มแดง)
