การใช้และการบำรุงรักษากล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ
กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพใช้ในการสังเกตและศึกษาชิ้นส่วนทางชีวภาพ เซลล์ชีวภาพ แบคทีเรียและการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่มีชีวิต การตกตะกอนของของเหลว ฯลฯ
สามารถสังเกตวัตถุโปร่งใสหรือโปร่งแสงอื่นๆ รวมทั้งผง อนุภาคละเอียด และวัตถุอื่นๆ วันนี้เรามาพูดถึงการใช้งานและหลังการผลิตกล้องจุลทรรศน์ชีวภาพกัน
การใช้กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ
(1) ใช้สภาพแวดล้อมและนิสัยการทำงาน
1. ใช้สภาพแวดล้อม
สถานที่ทำงานของกล้องจุลทรรศน์ควรสะอาด แห้ง ปราศจากการสั่นสะเทือน และปราศจากก๊าซที่มีฤทธิ์กัดกร่อน
2. นิสัยการทำงาน
(1) ความสูงของโต๊ะและสตูลควรเหมาะสม
(2) ในระหว่างการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ แม้ว่าจะใช้กล้องจุลทรรศน์ตาเดียวก็ต้องเปิดตาทั้งสองข้างพร้อมกันและต้องสังเกตตาซ้าย สำหรับการวาดหรือบันทึกด้วยตาขวา หากตาข้างหนึ่งเปิดอยู่และอีกข้างหนึ่งปิดอยู่ นัยน์ตาจะอ่อนล้าและไม่สามารถมองเป็นเวลานานได้ เมื่อทำงานไปนานๆ
(2) การเตรียมตัวก่อนใช้งาน
1. การติดตั้งระบบแสง
สำหรับไมโครสโคปที่ซื้อมาใหม่หรือระบบออพติคัลถูกถอดออก จะต้องติดตั้งไมโครสโคปก่อนใช้งาน เมื่อทำการติดตั้ง เพื่อป้องกันฝุ่นละอองตกลงด้านล่าง ควรติดตั้งตามลำดับจากบนลงล่าง นั่นคือ ตามลำดับของเลนส์ใกล้ตา เลนส์ใกล้วัตถุ เลนส์คอนเดนเซอร์ และแผ่นสะท้อนแสง รูปที่ 10-3-1 คือแผนภาพการติดตั้งกล้องจุลทรรศน์ ลูกศรแสดงตำแหน่งที่ติดตั้งเลนส์
เมื่อติดตั้งเลนส์ใกล้วัตถุ ควรยกกระบอกเลนส์ขึ้นก่อน หรือควรลดระยะรองรับลงเพื่อรักษาระยะห่างระหว่างคอนเวอร์เตอร์กับระยะ จากนั้น จับเลนส์ใกล้วัตถุ ใส่เข้าไปในพอร์ตสกรูของตัวแปลง และหมุนทวนเข็มนาฬิกาเล็กน้อย หลังจากติดตั้งเลนส์ใกล้วัตถุด้วยลวดลายผ้าไหมแล้ว ให้ขันสกรูตามเข็มนาฬิกาจนแน่นพอประมาณ เมื่อติดตั้งเลนส์ใกล้วัตถุ ควรติดตั้งตามเข็มนาฬิกาจากเล็กไปหาใหญ่ตามกำลังขยายของเลนส์ใกล้วัตถุ เมื่อแปลงเลนส์ใกล้วัตถุ อย่าดันเลนส์ใกล้วัตถุให้หมุนด้วยมือ มิฉะนั้น แกนออพติคอลของเลนส์ใกล้วัตถุจะเอียง ทางที่ดีควรถือจานหมุนของตัวแปลงเลนส์ด้วยมือเพื่อหมุน หรือจับวงกลมด้านนอกที่มีลายนูนที่จุดเชื่อมต่อด้วยมือเพื่อหมุนตัวแปลงเลนส์ใกล้วัตถุ
หลังจากติดตั้งเลนส์ใกล้ตาและเลนส์ใกล้วัตถุแล้ว ให้ใส่คอนเดนเซอร์เข้าไปในโครงยึดคอนเดนเซอร์ใต้แท่นวาง ความสูงของส่วนแทรกควรอยู่ในระดับที่เมื่อคอนเดนเซอร์ถูกยกขึ้นถึงจุดสูงสุด ส่วนหน้าสุดของเลนส์บนคอนเดนเซอร์จะอยู่ต่ำกว่าระนาบของแท่นวางเล็กน้อย เพื่อป้องกันไม่ให้สไลด์กระจกชนกับเลนส์ ของคอนเดนเซอร์ จากนั้นขันสกรูยึดของคอนเดนเซอร์ให้แน่น สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่มีแหล่งกำเนิดแสงแบบไม่ใช้ไฟฟ้า ในที่สุดตัวสะท้อนแสงจะถูกเสียบเข้าไปในซ็อกเก็ตใต้คอนเดนเซอร์
2. ปรับเทียบแกนลำแสง
ความสำคัญของการแก้ไขแกนออปติคัลคือการทำให้แกนออปติคอลหลักของเลนส์ใกล้วัตถุ เลนส์ใกล้ตา คอนเดนเซอร์ และจุดกึ่งกลางของไดอะแฟรมแปรผันตรงกับเส้นตรง ดังนั้นจึงเรียกอีกอย่างว่าการปรับโคแอกเชียลหรือการปรับจากส่วนกลาง หากแกนออปติคัลเอียง ความคลาดเคลื่อนจะเพิ่มขึ้น ความละเอียดและความคมชัดจะลดลง
วิธีการตรวจสอบคือเปิดไดอะแฟรมแบบปรับได้ให้สุด ขันเลนส์ใกล้วัตถุที่มีกำลังขยายต่ำเข้ากับแกนออปติคอล และลดกระบอกเลนส์ลงเพื่อให้ระยะห่างระหว่างเลนส์ใกล้วัตถุกับเวทีน้อยกว่าระยะการทำงานของวัตถุ เลนส์ (ต่ำกว่า 5 มม.) โดยไม่ต้องวางชิ้นงาน ให้ปรับมุมของตัวสะท้อนแสงเพื่อให้ขอบเขตการมองเห็นสว่างที่สุด หรือปรับความสว่างของหลอดไฟแหล่งกำเนิดแสงเพื่อให้ขอบเขตการมองเห็นเหมาะสมกับความสว่างและความมืด
จากนั้นถอดปลั๊กยางรองตาออกแล้วมองผ่านท่อโดยตรง ในขณะที่ค่อยๆ ย่อหรือเปิดไดอะแฟรมแบบปรับได้หลาย ๆ ครั้ง เมื่อไดอะแฟรมปิดจนสุด ภาพของไดอะแฟรม (เพียงเล็กน้อยในขณะนี้) ควรจะตกอยู่ที่กึ่งกลางของรูรับแสงของเลนส์ใกล้วัตถุ เมื่อเปิดรูรับแสงในระดับหนึ่ง ภาพของรูรับแสงควรตรงกับวงกลมสีดำของรูรับแสงของเลนส์ใกล้วัตถุ หากตรงตามเงื่อนไขสองข้อข้างต้น แสดงว่าเป็น "โคแอกเชียล" มิฉะนั้น จำเป็นต้องปรับเปลี่ยน
ทั้งเลนส์ตาและวัตถุเป็นแบบคงที่และไม่สามารถปรับค่าได้ การปรับโคแอกเชียลเป็นการปรับตำแหน่งของคอนเดนเซอร์เป็นหลัก มีสกรูแก้ไขแกนลำแสงสองตัวที่ทั้งสองด้านของโครงยึดคอนเดนเซอร์ของกล้องจุลทรรศน์บางรุ่น และสามารถปรับแนวแกนได้โดยการปรับสกรูสองตัวนี้ หัววัดชนิดอื่นรองรับด้วยสกรูสามตัวที่แยกจากกัน 120 องศาบนเฟรม ซึ่งหนึ่งในนั้นติดตั้งสปริงและสามารถยืดได้ สกรูอีกสองตัวสามารถหมุนได้ ปรับสกรูสองตัวให้พอดีกับเพลา
หลังจากปรับเทียบแกนลำแสงของกล้องจุลทรรศน์แล้ว หากไม่ได้ถอดคอนเดนเซอร์ออกหรือด้วยเหตุผลพิเศษอื่นๆ ก็ไม่จำเป็นต้องปรับเทียบบ่อยๆ
3. เตรียมชิ้นงาน
เตรียมชิ้นงานคุณภาพสูงเพื่อใช้ในภายหลัง
(3) วิธีการใช้แผ่นสะท้อนแสงและคอนเดนเซอร์และวิธีจัดแสง 1. การหรี่แสง
สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่ใช้กระจก โดยทั่วไปจะใช้กระจกแบนเพื่อสะท้อนแสงที่กระจัดกระจายของดวงอาทิตย์ ควรใช้แผ่นสะท้อนแสงแบบเว้าในที่แสงน้อยหรือเมื่อมีสิ่งรบกวนนอกหน้าต่างเท่านั้น
สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่ใช้แหล่งกำเนิดแสงไฟฟ้า เพียงปรับความสว่างให้เหมาะสม
2. การใช้หัววัด
(1) การปรับความสูงของคอนเดนเซอร์ ในกรณีของการฉายแสงแบบขนาน จุดโฟกัสของคอนเดนเซอร์ทั่วไปจะอยู่เหนือจุดกึ่งกลางของระนาบเลนส์ที่ปลายด้านบนประมาณ 1.25 มม. เมื่อใช้เลนส์กำลังขยายสูงหรือเลนส์น้ำมัน เนื่องจากกำลังขยายที่มาก ความสว่างของภาพสะท้อนในกระจกจึงมีน้อย และต้องใช้แสงที่เข้มข้น ดังนั้นควรยกคอนเดนเซอร์ไปที่จุดสูงสุดเพื่อให้จุดโฟกัสของคอนเดนเซอร์ตกลงบนระนาบชิ้นงาน แต่เมื่อใช้เลนส์ใกล้วัตถุกำลังขยายต่ำ คอนเดนเซอร์จะลดลงอย่างเหมาะสม
(2) การใช้รูรับแสงแบบปรับได้ รูรับแสงแบบปรับได้มีสองบทบาท หนึ่งคือการควบคุมฟลักซ์การส่องสว่างที่ส่งตรงไปยังชิ้นงาน อีกอันคือการเปลี่ยนรูรับแสงของคอนเดนเซอร์ ในสองบทบาทนี้ บทบาทหลังมีความโดดเด่น เพื่อให้ใช้ความละเอียดของเลนส์ใกล้วัตถุได้อย่างเต็มที่ ตามหลักการแล้ว ตัวเลขรูรับแสงของคอนเดนเซอร์ควรเท่ากับของเลนส์ใกล้วัตถุ มิฉะนั้นความละเอียดหรือความชัดเจนจะได้รับผลกระทบ
3. วิธีการให้แสงสว่าง
สำหรับกล้องจุลทรรศน์แหล่งกำเนิดแสงไฟฟ้า เวลาใช้งาน เพียงปรับแสงให้มีความสว่างที่เหมาะสม ไม่จำเป็นต้องเล็ง อย่างไรก็ตาม สำหรับกล้องจุลทรรศน์ระดับล่างที่ใช้แสงธรรมชาติ เพื่อให้ได้ผลการสังเกตที่ดี ต้องใช้แสงส่องสว่างอย่างเต็มที่ ดังนั้นควรปรับแสงก่อนการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ เมื่อหันไปทางแสง ให้หมุนเลนส์กำลังขยายต่ำไปที่แกนออปติคอล ยกคอนเดนเซอร์ให้เหมาะสม แล้วเปิดไดอะแฟรมแบบปรับได้ให้สุด จากนั้น มองผ่านช่องมองภาพขณะหมุนกระจกจนกว่าขอบเขตการมองเห็นจะสว่างและชัดเจนที่สุด หากคุณใช้แสงธรรมชาติ พยายามหลีกเลี่ยงการรบกวนกรอบหน้าต่างและกิ่งไม้ที่อยู่นอกหน้าต่าง
(4) การโฟกัสที่ถูกต้องของเลนส์ใกล้วัตถุ
หลังจากจัดแสงเสร็จสิ้นหรือปรับแสงที่เหมาะสมแล้ว ให้ยกกระบอกเลนส์ขึ้นหรือลดระดับลง ยึดสไลด์ชิ้นงานเข้ากับตัวเลื่อน ซึ่งก็คือตัวยึดชิ้นงาน และย้ายชิ้นส่วนที่จะตรวจสอบไปที่กึ่งกลางของรูแสง ของเวที จากนั้นเริ่มโฟกัส
ไม่ว่าจะทำการตรวจสอบแบบใด ควรเริ่มต้นด้วยเลนส์กำลังต่ำ เมื่อทำการโฟกัส ขั้นแรกให้ใช้วงล้อหยาบเพื่อลดกระบอกเลนส์ลง เพื่อให้ระยะห่างระหว่างเลนส์ด้านหน้าของกระจกที่มีกำลังขยายต่ำและกระจกครอบมีขนาดเล็กกว่าระยะการทำงานของเลนส์ใกล้วัตถุเล็กน้อย (ต่ำกว่า 5 มม.) เพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้เลนส์ใกล้วัตถุกดทับสไลด์ตัวอย่าง ให้มองจากด้านข้าง จากนั้น ขณะสังเกตขอบเขตการมองเห็นจากช่องมองภาพ ให้ใช้วงล้อหยาบเพื่อยกกระบอกเลนส์ขึ้นช้าๆ หลังจากเห็นภาพวัตถุเป็นครั้งแรก ให้ใช้วงล้อปรับละเอียดเพื่อปรับโฟกัสอย่างละเอียดจนกว่าภาพวัตถุจะชัดเจนที่สุด มุมมองของเลนส์ใกล้วัตถุกำลังขยายต่ำมีขนาดใหญ่ ซึ่งเอื้อต่อการสังเกตภาพรวมของชิ้นงาน คุณยังสามารถใช้ตัวย้ายหรือปรับวงล้อในแนวตั้งและแนวนอนเพื่อค้นหาเป้าหมายที่สังเกตได้ หากจำเป็น สามารถย้ายเป้าหมายที่พบไปที่กึ่งกลางของขอบเขตการมองเห็น พร้อมสำหรับการสังเกตด้วยเลนส์กำลังสูง
เมื่อแปลงจากเลนส์ใกล้วัตถุที่มีกำลังขยายต่ำเป็นเลนส์ใกล้วัตถุที่มีกำลังขยายสูง หากเลนส์ใกล้วัตถุเป็นอุปกรณ์ดั้งเดิมของกล้องจุลทรรศน์ และกระจกสไลด์และกระจกครอบที่ใช้ตรงตามมาตรฐาน โดยทั่วไป "การแปลงความสูงเท่ากัน" สามารถทำได้ . นั่นคือ หลังจากการแปลงแล้ว คุณจะมองเห็นภาพที่ชัดเจนได้ตราบเท่าที่คุณปรับปุ่มปรับละเอียดเล็กน้อย แต่เลนส์น้ำมันไม่ยืนยันความหยาบ ทางที่ดีควรยกกระบอกเลนส์ขึ้นก่อนเปลี่ยน และสุดท้ายปรับโฟกัสใหม่ตามวิธีการโฟกัสของเลนส์กำลังต่ำ
วิธีการใช้เลนส์น้ำมันมีดังนี้: ขั้นแรก ยกกระบอกเลนส์ขึ้น ถอดสไลด์ตัวอย่างออก ลดคอนเดนเซอร์ลงเล็กน้อย และหยดน้ำมันซีดาร์สองหยดบนเลนส์ของคอนเดนเซอร์ (ไม่ควรมีฟองอากาศในน้ำมัน . ถ้ามี สามารถเอาไม้เล็ก ๆ ออกได้) จากนั้นวางชิ้นงานทดสอบกลับที่ตำแหน่งเดิมและยกคอนเดนเซอร์ขึ้นเพื่อให้พื้นผิวด้านล่างของสไลด์สัมผัสกับน้ำมันซีดาร์ ด้วยวิธีนี้การแช่น้ำมันของคอนเดนเซอร์จะเสร็จสมบูรณ์ จากนั้น หยดน้ำมันซีดาร์ 1 หยดลงบนใบปิด จากนั้นให้มองจากด้านข้าง และใช้การปรับหยาบเพื่อลดกระบอกเลนส์ให้ต่ำที่สุดเท่าที่จะทำได้ จนกว่าเลนส์ด้านหน้าของเลนส์น้ำมันจะแช่อยู่ในน้ำมันซีดาร์ (แต่ยังไม่สัมผัสกับกระจกสไลด์) เป็นอันเสร็จสิ้นการแช่น้ำมันของ เลนส์ใกล้วัตถุ จากนั้น ขณะสังเกตจากช่องมองภาพ ให้ใช้วงล้อขนาดเล็กเพื่อยกกระบอกเลนส์ขึ้นอย่างช้าๆ (ระวังอย่าบิดผิดทิศทางและบดกระจกครอบ) จนกว่าภาพวัตถุที่ชัดเจนที่สุดจะปรากฏในขอบเขตการมองเห็น
การแช่น้ำมันของคอนเดนเซอร์ยังสามารถใช้วิธีหยดน้ำมันอีกวิธีหนึ่งได้ นั่นคือ แทนที่จะหยดน้ำมันบนเลนส์ของคอนเดนเซอร์โดยตรง ให้พลิกสไลด์กลับด้านแล้วหยดน้ำมันลงบนพื้นผิวด้านล่างของสไลด์ จากนั้นหมุน อีกครั้ง จัดตำแหน่งและวางไว้บนหัววัด จากนั้นยกหัววัดขึ้นเพื่อให้การแช่น้ำมันของหัววัดเสร็จสมบูรณ์ แม้ว่าวิธีนี้จะไม่ราบรื่นนัก แต่ก็ปลอดภัยกว่า บางคนใช้แท่งแก้วสัมผัสกับคอนเดนเซอร์โดยตรงเพื่อทาน้ำมันซีดาร์ วิธีนี้จะทำให้เลนส์เป็นรอยได้ง่ายและไม่ควรใช้
เมื่อใช้เลนส์น้ำมัน ไม่อนุญาตให้เติมน้ำมันซีดาร์ระหว่างคอนเดนเซอร์และชิ้นงาน นั่นคือยังคงใช้อากาศเป็นสื่อกลางบนคอนเดนเซอร์ แต่จะทำให้ความละเอียดของเลนส์ใกล้วัตถุลดลง
หากคุณจำเป็นต้องเปลี่ยนกลับไปใช้เลนส์ใกล้วัตถุกำลังขยายสูงสำหรับการสังเกตหลังจากใช้เลนส์น้ำมัน ให้เช็ดน้ำมันบนกระจกครอบออกเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของเลนส์ใกล้วัตถุกำลังสูง อย่างไรก็ตาม ไม่จำเป็นต้องเช็ดน้ำมันบนหัววัด ตราบใดที่รูรับแสงลดลงเล็กน้อยอย่างเหมาะสม
หลังจากใช้เลนส์น้ำมันแล้ว ควรเช็ดน้ำมันซีดาร์ให้สะอาดทันเวลา สามารถเช็ดเลนส์ได้ 1 หรือ 2 ครั้งด้วยกระดาษเช็ดเลนส์ที่สะอาดเพื่อเช็ดน้ำมันส่วนใหญ่ออก จากนั้นเช็ดสองครั้งด้วยกระดาษเช็ดเลนส์ที่ชุบไซลีน และสุดท้ายเช็ดทำความสะอาดด้วยกระดาษเช็ดเลนส์ วิธีทำความสะอาดคอนเดนเซอร์ก็เหมือนกัน หากต้องการเก็บตัวอย่างไว้ สามารถเช็ดทำความสะอาดน้ำมันซีดาร์บนกระจกเลื่อนได้โดย "ดึงกระดาษ" ปิดกระจกสไลด์ด้วยกระดาษเช็ดเลนส์ หยดไซลีนหนึ่งหยดลงบนกระดาษ ลากแถบกระดาษในขณะที่กระดาษเปียก และเช็ดทำความสะอาดหลายๆ ครั้งติดต่อกัน
ประการสุดท้าย ชี้ให้เห็น: ในระหว่างกระบวนการโฟกัสทั้งหมด (โดยเฉพาะการโฟกัสของเลนส์ใกล้วัตถุที่มีกำลังขยายสูงและเลนส์น้ำมัน) การเคลื่อนไหวทุกอย่างควรทำอย่างช้าๆ มิฉะนั้นภาพวัตถุจะกะพริบและไม่พบเป้าหมายของการสังเกต
