อะไรคือความแตกต่างระหว่างกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์และกล้องจุลทรรศน์แบบกลับด้าน
กล้องจุลทรรศน์เป็นเครื่องมือสำคัญในการเพาะเลี้ยงเซลล์และการทดลองอนุพันธ์ที่เกี่ยวข้อง ปัจจุบันมีกล้องจุลทรรศน์หลายประเภทในท้องตลาด และการเลือกกล้องจุลทรรศน์ที่ตรงตามความต้องการและเหมาะสมถือเป็นความท้าทาย ด้านล่างนี้เราจะแนะนำหลักการของกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวและกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ให้ทุกคนได้เลือกใช้
กล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัว เช่นเดียวกับกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป ส่วนใหญ่ประกอบด้วยสามส่วน: ส่วนทางกล ส่วนแสง และส่วนเกี่ยวกับแสง
องค์ประกอบของกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวจะเหมือนกับกล้องจุลทรรศน์แบบตั้งตรงทั่วไป ยกเว้นว่าเลนส์ใกล้วัตถุและระบบไฟส่องสว่างจะกลับด้าน โดยอันแรกอยู่ใต้เวทีและอันหลังอยู่เหนือเวที
โครงสร้างนี้ขยายระยะห่างที่มีประสิทธิภาพระหว่างระบบสปอตไลท์ส่องสว่างและเวทีได้อย่างมาก ทำให้ง่ายต่อการวางเครื่องมือสังเกตการณ์ที่หนาขึ้น เช่น จานเพาะเลี้ยง และขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ (แน่นอนว่าสามารถใช้กระจกสไลด์ได้เช่นกัน) ในขณะที่ระยะห่างในการทำงานระหว่าง เลนส์ใกล้วัตถุและวัสดุไม่จำเป็นต้องมีขนาดใหญ่มาก
สถาบันการแพทย์และสุขภาพ มหาวิทยาลัย และสถาบันวิจัยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวเพื่อสังเกตจุลินทรีย์ เซลล์ แบคทีเรีย การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ สารแขวนลอย ตะกอน ฯลฯ สามารถสังเกตกระบวนการขยายและแบ่งเซลล์และแบคทีเรียในอาหารเลี้ยงเชื้อได้อย่างต่อเนื่อง และ สามารถจับกระบวนการนี้ในรูปแบบใดก็ได้
ใช้กันอย่างแพร่หลายในสาขาต่างๆ เช่น เซลล์วิทยา ปรสิตวิทยา มะเร็งวิทยา ภูมิคุ้มกันวิทยา พันธุวิศวกรรม จุลชีววิทยาอุตสาหกรรม และพฤกษศาสตร์
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้เพื่อศึกษาการดูดซึม การขนส่ง การกระจาย และตำแหน่งของสารภายในเซลล์
สำหรับวัตถุที่ทดสอบ มีสองวิธีในการสร้างแสงเรืองแสง: แสงเรืองแสงที่เกิดขึ้นเอง ซึ่งปล่อยออกมาโดยตรงจากการฉายรังสีอัลตราไวโอเลต; การเรืองแสงทุติยภูมิเกิดขึ้นเมื่อวัตถุที่สังเกตได้รับการบำบัดด้วยสีย้อมฟลูออเรสเซนต์และสัมผัสกับแสงอัลตราไวโอเลตก่อนที่จะเปล่งแสงฟลูออเรสเซนต์
สารบางชนิดในเซลล์ เช่น คลอโรฟิลล์ ทำให้เกิดการเรืองแสงได้เองหลังจากสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต สารบางชนิดอาจไม่เปล่งแสงเรืองแสง แต่ถ้าย้อมด้วยสีย้อมเรืองแสงหรือแอนติบอดี้เรืองแสง สารเหล่านั้นก็สามารถเปล่งแสงเรืองแสงทุติยภูมิได้ภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ใช้แหล่งกำเนิดแสงแบบจุดที่มีประสิทธิภาพการส่องสว่างสูงเพื่อปล่อยแสงความยาวคลื่นจำนวนหนึ่ง (UV 365 นาโนเมตรหรือยูวีบลู 420 นาโนเมตร) ผ่านระบบกรองสีเป็นแสงกระตุ้น ซึ่งจะกระตุ้นสารฟลูออเรสเซนต์ในตัวอย่างให้เปล่งแสงสีต่างๆ ออกมา หลังจากนั้นจะสังเกตผ่านการขยายของเลนส์ใกล้วัตถุและช่องมองภาพ
ด้วยวิธีนี้ แม้ว่าแสงฟลูออเรสเซนต์จะอ่อน แต่ก็สามารถจดจำได้ง่ายและมีความไวสูงภายใต้พื้นหลังที่มีคอนทราสต์สูง ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับศึกษาโครงสร้างเซลล์ การทำงาน และองค์ประกอบทางเคมี
