ทำไมกำลังขยายของเลนส์น้ำมันจึงใหญ่กว่าเลนส์ใกล้วัตถุทั่วไป
เหตุผลที่จำเป็นต้องแก้ไขแบคทีเรียก่อนการย้อมสีในการทดลองทางจุลชีววิทยา:
1: ฆ่าเซลล์ ง่ายต่อการเปื้อนด้วยสีย้อม
2: ทำให้แบคทีเรียเกาะติดกับสไลด์แก้ว และไม่ง่ายที่จะถูกชะล้างด้วยน้ำ
เมื่อทำการซ่อมควรทำให้แห้งอย่างช้าๆ หากคุณต้องการเร่งความเร็วจริง ๆ คุณสามารถทำให้แห้งสองสามครั้งในระยะเหนือเปลวไฟของตะเกียงแอลกอฮอล์ อย่าปล่อยให้แผ่นกระจกร้อนขึ้น มิฉะนั้นอาจทำลายรูปแบบชีวิตของแบคทีเรียได้
การย้อมสีแกรมและการสังเกตแบคทีเรียด้วยกล้องจุลทรรศน์
1. หลักการทดลอง
หลักการย้อมสีแกรม: แบคทีเรียตอบสนองต่อการย้อมสีแกรมแตกต่างกันเนื่องจากองค์ประกอบและโครงสร้างของผนังเซลล์ ผนังเซลล์ของแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่เป็นปมเครือข่ายที่เกิดจากเพปทิโดไกลแคน เมื่อรักษาด้วยเอทานอล ขนาดรูพรุนของโครงสร้างเครือข่ายจะเล็กลงเนื่องจากการคายน้ำ และความสามารถในการซึมผ่านจะลดลง ดังนั้นสารที่ซับซ้อนของผลึกไวโอเลต-ไอโอดีนจึงไม่สามารถถูกชะออกและเก็บไว้ในเซลล์ได้ง่าย และสีน้ำเงิน- สีม่วงของสารย้อมสีหลักยังคงอยู่หลังจากการลดสีและการย้อมสี ชั้นเพปทิโดไกลแคนของผนังเซลล์ของแบคทีเรียแกรมลบนั้นบางและมีปริมาณไขมันสูง ดังนั้นเมื่อทำการบำบัดด้วยการลดสี ไขมันจะถูกละลายด้วยเอธานอล (หรืออะซิโตน) และความสามารถในการซึมผ่านของผนังเซลล์จะเพิ่มขึ้น ดังนั้น คอมเพล็กซ์ของคริสตัลไวโอเลต-ไอโอดีน จะถูกชะล้างได้ง่ายกว่า และหลังจากการย้อมด้วยคราบเคาน์เตอร์ เซลล์จะถูกย้อมด้วยสีแดงของคราบเคาน์เตอร์ หลักการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์: กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดาสมัยใหม่ใช้ระบบเลนส์สองระบบคือเลนส์ใกล้ตาและเลนส์ใกล้วัตถุเพื่อขยายภาพ จึงมักเรียกว่ากล้องจุลทรรศน์แบบผสม ในระบบออปติกของกล้องจุลทรรศน์ ประสิทธิภาพของเลนส์ใกล้วัตถุมีความสำคัญที่สุด และกำลังขยายของเลนส์น้ำมันนั้นใหญ่ที่สุด ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญที่สุดสำหรับการวิจัยทางจุลชีววิทยา จุดประสงค์หลักของการเติมน้ำมันแช่ระหว่างสไลด์แก้วและเลนส์คือเพื่อเพิ่มความสว่างของแสงและเพิ่มความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ น้ำมันถูกใช้แทนอากาศเป็นตัวกลางส่งผ่านแสงเพื่อลดการหักเหหรือการสะท้อนทั้งหมดของแสง และทำให้ภาพที่สังเกตได้ชัดเจนขึ้น
2. อุปกรณ์การทดลอง
1. อาณานิคม:
Escherichia coli 24h สารอาหาร agar slant culture,
Staphylococcus aureus เกี่ยวกับการเพาะเลี้ยงวุ้นด้วยสารอาหารเป็นเวลา 24 ชั่วโมง Bacillus subtilis 12-18h การเลี้ยงวุ้นด้วยสารอาหาร
2. สารละลายหรือรีเอเจนต์:
น้ำกลั่น, สารละลายไอโอดีน, น้ำยาย้อมสีคริสตัลไวโอเลต, แอลกอฮอล์ 95 เปอร์เซ็นต์, น้ำยาย้อมสีแซฟรานิน, น้ำมันซีดาร์ 3. เครื่องมือ:
กล้องจุลทรรศน์, สไลด์แก้ว, ห่วงเพาะเชื้อ, ตะเกียงแอลกอฮอล์, แหนบ, เนื้อเยื่อเลนส์
3. ขั้นตอนการทดลอง
a:
1. สเมียร์
นำแผ่นสไลด์ออก จุดไฟแผ่นสไลด์ เผาแอลกอฮอล์บนแผ่นสไลด์และฆ่าเชื้อ ใส่น้ำกลั่นเล็กน้อยตรงกลาง ใช้ห่วงเพาะเชื้อค่อย ๆ เลือกแบคทีเรียจำนวนเล็กน้อยบนวัสดุเอียงของการทดสอบ ในระหว่างกระบวนการทั้งหมด ปากหลอดทดลองควรอยู่เหนือตะเกียงแอลกอฮอล์ และความเร็วควรเร็วเพื่อป้องกันการปนเปื้อนของอาหารเลี้ยงเชื้อ จากนั้นป้ายหยดน้ำเล็กๆ บนกระจกสไลด์เป็นวงกลม หยุดเมื่อหยดน้ำขุ่น และรอให้แห้งและแก้ไข
2. การย้อมสีขั้นต้น
หยดคริสตัลไวโอเลต (ควรปิดฟิล์มแบคทีเรียไว้เฉยๆ) บนโคโลนี ย้อมเป็นเวลา 1-2 นาที เทน้ำยาย้อมสีออก และล้างด้วยน้ำสะอาดจากด้านบนของสไลด์จนกระทั่งสารชะล้างไม่มีสี และวางรอยเปื้อนบนสไลด์ สลัดน้ำบนชิ้น
3. ประชดประชัน
เติมสารละลายไอโอดีนทีละหยดเพื่อชะล้างน้ำที่เหลือ ปิดฝาประมาณ 1 นาที แล้วล้างด้วยน้ำ
4. การลดสี
เขย่าน้ำบนสไลด์แก้ว เอียงสไลด์แก้ว และเติมแอลกอฮอล์ 95 เปอร์เซ็นต์เพื่อทำให้พื้นหลังสีขาวจางลง จนกว่าแอลกอฮอล์ที่ไหลออกมาจะไม่ปรากฏเป็นสีน้ำเงิน ล้างแอลกอฮอล์ด้วยน้ำทันที แล้ววางสไลด์แก้ว เขย่า ปิดน้ำบนชิ้น
5. การย้อมสี
ย้อมทับด้วยสารละลายแซฟรานินประมาณ 1-2 นาที ล้างด้วยน้ำ แล้วซับให้แห้งด้วยกระดาษซับ
6. การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์:
มองหากลุ่มแบคทีเรียที่จะสังเกตเห็นใต้เลนส์กำลังขยายต่ำ (เลื่อนสไลด์ไปเรื่อย ๆ หากคุณรู้สึกถึงเงาสีแดง ให้หยุดทันที ปรับกำลังขยาย หากไม่ใช่อาณานิคม ให้ค้นหาต่อไป) ยกกระบอกเลนส์ขึ้น แล้วสลับไปที่กระจกถ่ายน้ำมัน เติมน้ำมันซีดาร์หนึ่งหยดลงในพื้นที่ตัวอย่าง และลดกระบอกเลนส์ลงอย่างระมัดระวังด้วยตัวปรับหยาบ เพื่อให้เลนส์น้ำมันแช่อยู่ในน้ำมันและเกือบสัมผัสกับชิ้นงานทดสอบ ยกคอนเดนเซอร์ไปที่ตำแหน่งสูงสุดและเปิดรูรับแสงจนสุด ใช้ตัวปรับหยาบเพื่อยกกระบอกเลนส์ขึ้นช้าๆ จนกระทั่งภาพวัตถุปรากฏขึ้นในมุมมองภาพ และใช้ตัวปรับละเอียดเพื่อให้ชัดเจนและอยู่ในโฟกัส
